陕西部分地区零售肉中沙门氏菌特性研究

论文摘要

在我国细菌性食物中毒中,70%80%由沙门氏菌引起,鸡肉、猪肉、牛肉等肉制品是沙门氏菌常污染的食品。近年来,多重耐药（耐大于等于2种抗生素）的沙门氏菌在世界和我国不断被发现,已成为全世界的难题。研究沙门氏菌在零售肉中的污染以及耐药状况,耐药机理和耐药传播机理具有重要的理论意义和实践意义。本研究分离到的220株沙门氏菌共采自西安及杨凌地区零售肉209份鸡肉、猪肉、牛肉和羊肉样品,其中鸡肉126份,猪肉30份,牛肉24份,羊肉29份,分属于14种不同的血清型,其中汤卜逊沙门氏菌在陕西省很少被报导。零售肉总体污染率达到54.07%,其中鸡肉污染率最高。采用琼脂扩散法检测了220株沙门氏菌对β-内酰胺类（氨苄西林、阿莫西林、头孢曲松和头孢西丁）、四环素类（四环素）、氯霉素类（氯霉素）、磺胺类（磺胺甲噁唑）、氨基糖苷类（硫酸庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星）和氟喹诺酮类（环丙沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星和加替沙星）共14种抗生素的耐药情况。结果表明对磺胺甲噁唑的耐药率最高（40%）,其次为卡那霉素（36.82%）、四环素（35%）、阿莫西林（25.45%）和氨苄西林（25%）,鸡肉中沙门氏菌耐药率最高。多重耐药现象已经相当严重,其中耐3种及以上的占26.36%（58/220）,耐10种及以上的占17.27%（38/220）,耐13中抗生素的占12.73%（28/220）。多重耐药以血清型Salmonella.Shubra and Salmonella.Indiana最多。以耐药结果为依据,选取63株多重耐药（耐2种及以上）沙门氏菌扩增其1类整合子。结果显示共有10株沙门氏菌含有1类整合子,携带率为（15.87%）,共有两种1类整合子,约2kb和约1.2kb。测序结果用Blast在Genebank中对比分析耐药基因盒,表明1.2kb携带的耐药基因有IntI1-bla-PSE1; 2kb携带的耐药基因盒有dhfrXII-orf-aadA2。对相同大小的整合子进行酶切,结果显示相同大小的整合子酶切片段相同。根据耐药结果,选取合适的供体菌和受体菌,采用膜过滤法测定耐药通过接合在沙门氏菌之间的传播情况。结果表明接合频率在10-710-5不等,对氨苄西林、阿莫西林、氯霉素、四环素和磺胺甲噁唑的耐药最容易被转移,对氟喹诺酮类的耐药大多没有被转移。有些受体菌接收到供体菌的质粒后,有些最小抑菌浓度也发生了改变。有些供体菌的整合子也进行了转移。选取涵盖不同来源、不同耐药谱的典型菌株提取质粒发现,质粒大小从小于2kb到大于24kb不等,所选41株沙门氏菌中,22株不含质粒,其中6株对所有抗生素敏感的菌株中都不含质粒。35株耐药菌株中,16株不含质粒。耐药谱一样的菌株质粒图谱不一定相同。本研究发现,沙门氏菌在陕西零售肉中的污染和耐药已经相当严重;含有1类整合子的菌株都表现为多重耐药;耐药、质粒和1类整合子很容易通过接合在沙门氏菌之间传播。单独的质粒图谱分型效果不好。这为指导临床用药和控制食源性致病菌的耐药传播提供了科学依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 食源性疾病已成为全球公共卫生与经济问题
• 1.2 微生物污染是食源性疾病的罪魁祸首
• 1.3 沙门氏菌是微生物污染的主要病原菌
• 1.4 多重耐药沙门氏菌已经成为全世界的难题
• 1.5 整合子-耐药基因盒系统与多重耐药
• 1.6 质粒与多重耐药的贡献
• 1.7 耐药基因传播方式
• 1.8 沙门氏菌分型技术
• 1.9 本研究的意义和方法
• 第二章 沙门氏菌分离和耐药谱测定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.1.1 菌株
• 2.1.1.2 主要试剂与仪器
• 2.1.2 方法
• 2.1.2.1 沙门氏菌分离方法
• 2.1.2.2 PCR 检测方法
• 2.1.2.3 药敏性测定方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 零售肉沙门氏菌污染状况
• 2.2.2 血清型分布以及血清型与耐药的关系
• 2.2.3 零售肉沙门氏菌耐药状况
• 2.3 讨论
• 2.3.1 零售肉中沙门氏菌污染状况
• 2.3.2 血清型分布以及与耐药的关系
• 2.3.3 零售肉中沙门氏菌耐药状况
• 2.3.3.1 不同来源沙门氏菌耐药情况讨论
• 2.3.3.2 沙门氏菌对常见抗生素的耐药讨论
• 2.3.3.3 沙门氏菌对头孢类抗生素的耐药讨论
• 2.3.3.4 沙门氏菌对氟喹诺酮类和磺胺类抗生素的耐药讨论
• 2.3.3.5 沙门氏菌多重耐药谱讨论
• 第三章 多重耐药沙门氏菌的整合子及携带基因盒分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 菌株
• 3.1.1.2 主要试剂
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 PCR 扩增1 类整合子
• 3.1.2.2 PCR 产物纯化及测序
• 3.1.2.3 PCR 产物酶切
• 3.2 结果
• 3.2.1 1 类整合子检测结果
• 3.2.2 1 类整合子测序结果
• 3.2.3 1 类整合子酶切结果
• 3.3 1 类整合子结果讨论
• 3.3.1 1 类整合子检测率结果讨论
• 3.3.2 1 类整合子携带基因盒讨论
• 3.3.3 多重耐药问题的严重性
• 第四章 接合试验
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.1.1 菌株
• 4.1.1.2 主要试剂
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 第五章 质粒图谱分析
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.1.2.1 菌株的选取
• 5.1.2.2 质粒提取
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 5.3.1 质粒图谱与耐药的关系
• 5.3.2 质粒图谱分型的效果
• 第六章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介