黄粉虫抗氧化肽的分离纯化及功能的研究

论文摘要

黄粉虫体内含有丰富的蛋白质,目前酶法水解蛋白制备生物活性肽得到了越来越多的关注和研究本文对黄粉虫蛋白进行双蛋白酶酶解制备抗氧化肽,同时研究其生物活性,为开发新的抗氧化肽资源寻找一条有效的途径,具有重要的经济价值和社会意义。主要结果如下:(1)以水解度和酸溶性肽得率为指标,确定了胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase为最优酶系组合,并对其水解工艺进行了优化。研究了酶活比、固液比、加酶量、pH值和温度5种因素对酶解反应的影响。在此基础上以水解度和酸溶性肽得率为响应值设计了3因素(加酶量、pH值和温度)3水平的响应面试验,得到最佳水解条件为:酶解时间120min,酶活比1:1,料液比1:3,加酶量23.41㎎/g,pH 8.77和酶解温度53.4℃。在最优的水解条件制得的低分子多肽水解液水解度高达21.61%,酸溶性肽得率为92.09%。(2)通过Sephadex G—25凝胶过滤色谱,酶解液被分离成四个组分,四个组分中峰3的抗氧化活性最强;利用强碱性阴离子交换色谱将峰3分离成两部分,组分I的抗氧化活性高于组分Ⅱ的抗氧化活性;利用强酸性阳离子交换色谱将组分I分离成两个组分,其中组分A对羟自由基和超氧自由基清除作用最强,清除率分别可达到74.20%和87.32%。(3)氨基酸组成分析发现组分A中谷氨酸(Glu)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)的含量非常丰富,含有8种人体必需氨基酸,占黄粉虫抗氧化肽氨基酸总量的41.84%,其必须氨基酸组成合理,含量丰富,具有较高的营养价值和较强的保健功能。(4)酶解出来的氨基酸水解液颜色发黑影响感观,用活性炭对水解液进行了脱色试验,研究表明最佳脱色条件:脱色pH为3,活性炭用量为3.0%,脱色时间为2h,脱色温度为40℃,在最佳脱色条件下其脱色率可达到73%以上。

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ABSTRACT

第一章文献综述

1.1 黄粉虫概述

1.1.1 黄粉虫的人工饲养

1.1.2 黄粉虫的营养价值

1.1.3 黄粉虫食品的开发利用

1.1.4 黄粉虫食品开发的前景

1.2 生物活性肽及其发展历史

1.2.1 生物活性肽及其分类

1.2.2 活性肽的研究历史

1.3 生物活性肽的生理活性及其研究现状

1.3.1 活性肽的吸收特点

1.3.2 抗氧化活性肽

1.3.3 其他生物活性肽及其研究进展

1.4 生物活性肽的开发

1.4.1 生物活性肽的制备方法

1.5 生物活性肽的分离纯化、分析方法研究进展

1.5.1 超滤

1.5.2 色谱

1.6 蛋白质酶解产物在医药、食品方面的应用

1.7 研究目的意义与技术路线

1.7.1 研究的目的及意义

1.7.2 技术路线和主要研究内容

第二章黄粉虫蛋白的酶解工艺技术的研究

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 试验方法

2.2 结果与分析

2.2.1 单酶的筛选

2.2.2 双蛋白酶对黄粉虫蛋白水解效果的影响

2.2.3 双蛋白酶水解工艺条件的研究

2.2.4 双酶水解工艺条件优化数学模型的建立

2.2.5 双酶水解条件的优化参数组合及验证

2.3 小结

（1）酶解黄粉虫蛋白最佳蛋白酶的确定

（2）双蛋白酶酶解黄粉虫蛋白参数的确定

第三章黄粉虫水解液的抗氧化活性的测定及活性肽的分离纯化

3.1 材料与仪器

3.1.1 试验材料及主要试剂

3.1.2 主要仪器设备

3.2 试验方法

3.2.1 凝胶层析柱的制备

3.2.2 凝胶柱总体积（Vt）

3.2.3 外水体积（Vo）的测定

3.2.4 凝胶层析测定多肽分子量

3.2.5 抗氧化性试验方法

3.2.6 阴离子交换树脂法分离纯化

3.2.7 阳离子交换树脂法分离纯化

3.2.8 氨基酸组成分析

3.3 结果与分析

3.3.1 Sephadex G-25 凝胶层析分子量标准曲线

3.3.2 Sephadex G-25 凝胶层析测定黄粉虫水解液的分子量分布

3.3.3 阴离子交换树脂法分离纯化峰3

3.3.4 阳离子文换树脂法分离纯化组分I

3.3.5 A 部分的氨基酸组成分析

3.4 小结

第四章黄粉虫水解液的脱色

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 试验方法

4.2 结果与分析

4.2.1 黄粉虫水解液中有色物质测定波长的确定

4.2.2 单因素试验结果

4.2.3 正交试验结果

4.2.4 验证试验

4.3 小结

第五章结论、讨论、创新点及展望

5.1 结论

5.2 讨论

5.3 创新点

5.4 展望

参考文献

致谢

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