PRV gE～-/gI～-疫苗株培养条件优化及小白鼠对其蜂胶疫苗细胞免疫应答的研究

论文题目: PRV gE～-/gI～-疫苗株培养条件优化及小白鼠对其蜂胶疫苗细胞免疫应答的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 临床兽医

作者: 廖继华

导师: 傅童生,沈志强

关键词: 猪伪狂犬病,细胞培养,培养条件优化,生物学特性,细胞免疫

文献来源: 湖南农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本研究采用缺失gE和gI双基因的PRV疫苗株和山东省滨州畜牧兽医研究所沈志强研究员研制的猪伪狂犬病基因缺失（PRV gE-／gI-）蜂胶灭活疫苗进行研究，为PRV gE-／gI-蜂胶灭活疫苗推广应用提供理论依据。研究结果表明：1．gE-／gI-基因缺失病毒株在Vero细胞、Marc145细胞、PK15细胞、BHK21细胞和CEF细胞上均可观察到细胞病变，完全符合伪狂犬病毒的泛嗜性特点；同时测定该疫苗株在不同培养细胞上的病变稳定时间、所致病变情况（CPE）、适应情况及滴度(TCID50／0.1ml)等，确定了最佳病毒增殖用的培养细胞。2．对gE-／gI-疫苗株在Vero细胞上的培养条件进行了优化研究，2％的血清浓度、PH7.0、2：1传代细胞培养1天后接毒及3倍正常密度的高密度细胞有利于该疫苗株的增殖。3．经克隆纯化后阳性血清能中和本疫苗株，理化特性符合PRV的生物学特性，多次冻融对病毒滴度影响较大，0.1％甲醛在56℃30分钟、37℃1h即可使病毒活力大大降低。4．依据国际通用3R实验动物原则，选择对伪狂犬病毒敏感的实验动物小白鼠进行猪伪狂犬基因缺失蜂胶灭活疫苗的细胞免疫应答影响试验。采用MTT比色法行淋转试验，计算脾重／体重比率。蜂胶苗组脾重／体重比率显著高于对照组，蜂胶疫苗免疫后7天便显示出明显的细胞免疫增强作用。结论：本研究观察到了PRV gE-／gI-在多种真核细胞上的培养特性；确定了用于猪伪狂犬病疫苗抗原制备的最佳病毒增殖用培养细胞；摸索出了PRV gE-／gI-疫苗株在Vero细胞上的最佳培养条件；验证了PRV gE-／gI-蜂胶疫苗良好的细胞免疫效果，为PRV的免疫防治提供了一条崭新的途径。

论文目录:

摘要

Abstract

前言

1.猪伪狂犬病毒研究进展

1.1 PRV病原学学研究进展

1.2 病毒的溶细胞性感染复制

2.天然免疫增强剂—蜂胶

2.1 蜂胶的免疫增强作用机理

2.2 天然绿色环保型免疫增强剂—蜂胶疫苗佐剂应用的成功范例

3.研究目的和意义

试验一 PRV gE~-/gI~-基因缺失疫 苗株的细胞培养适应性试验

1.试验材料与地点

2.试验方法

2.1 接种病毒用细胞的培养

2.2 病毒接种培养

3 结果与分析

4 讨论

试验二 PRV gE~-/gI~-疫苗株在Vero细胞上培养条件的优化研究

1.材料

2.方法

2.1 病毒滴定

2.2 血清对PRV gE~-/gI~-在Vero细胞增殖的试验

2.3 pH对PRV在Vero细胞上增殖的影响试验

2.4 不同密度Vero细胞对PRV增殖的影响试验

2.5 不同接毒时间和收毒时间对PRV增殖的影响试验

3 结果与分析

试验三 PRV gE-/gI-疫苗株的细胞培养与理化特性研究

1.材料

2.方法

2.1 病毒的蚀斑实验

2.2 病毒中和试验

2.3 病毒一步生长曲线的测定

2.4 病毒理化性质试验

3.结果与分析

4 讨论

试验四 小白鼠对PRV gE~-/gI~-基因缺失蜂胶疫苗细胞免疫应答试验

1 材料

2 方法

2.1 试验分组和免疫

2.2 试验设计

2.3 细胞免疫部分指标测定:淋巴细胞转化试验(MTT法)

3 结果与分析

4 讨论

结论

参考文献

本论文常用英文缩写词

致谢

作者简介

发布时间: 2007-12-06

参考文献

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