六色流式细胞术检测儿童B系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型的实验研究

论文摘要

背景:B系急性淋巴白血病（B-linage acute lymphocytic leukemia,B-ALL）是表达早期白细胞分化抗原的恶性克隆性疾病,其发病率居儿童恶性肿瘤之首。随着流式细胞术（flow cytometry,FCM）的发展及系列相关单克隆抗体的应用,作为传统的形态学和细胞化学检查的必要补充,免疫分型已成为研究急性淋巴细胞白血病的基本手段之一。由于白血病细胞是肿瘤细胞,会出现与正常细胞表面抗原不同的免疫表型特征,既白血病相关免疫表型（Leukemia associated immunophenotype,LAIP）。LAIP一方面可以成为白血病的诊断依据,另一方面也为今后微小残留病（minimal residual disease, MRD）的监测提供了依据。通过免疫分型不仅可以确定B-ALL的细胞类型和分化阶段,而且依据初诊免疫分型时检查出的LAIP,也成为了MRD检测的重要手段之一。以往B系急性淋巴细胞白血病LAIP的检测主要是利用三色或四色流式细胞术进行。近年来,随着新的荧光标记抗体技术的出现、多色荧光标记抗体的开发和流式细胞仪设备的改进,使利用六色流式细胞术进行LAIP的检测成为可能。本研究在以往我院三色流式细胞术免疫分型的基础上,探讨六色流式细胞技术在B系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型检测中的应用。目的:1、探讨广州地区105例B-ALL患儿白血病相关免疫表型体征,为利用六色流式细胞术进行白血病相关免疫表型检测的抗体组合选择提供参考和依据。2、评价六色流式细胞术在B系急性淋巴细胞白血病检测中抗体阳性率的稳定性,探讨六色流式细胞术在B系急性淋巴细胞白血病相关免疫表型检测中的优势,为运用六色流式细胞术进行MRD检测提供参考和依据。方法:1、回顾分析广州市妇女儿童医疗中心2008.8-2010.2收治的105例三色流式细胞术诊断为B-ALL初诊患儿免疫分型结果,以10例非白血病患儿骨髓检测结果为对照。2、利用CD20/CD34/CD10/CD22/CD45/CD19、CD7/CD5/CD13/CD33/CD45/ CD19两组六色抗体组合对25例三色流式细胞术免疫分型诊断为B-ALL的患儿骨髓标本进行六色流式细胞术检测,以10例非白血病患儿骨髓标本检测结果为对照。结果:1、105例患儿中98例可检测出LAIP,LAIP的表达特征为:CD19、CD10、CD34、CD22、HLA-DR过阳性表达率分别为25%、47%、33%、11%、9%;CD45、CD38、HLA-DR弱阳性或缺失表达异常表达率分别为66%、16%、5%;CD34、CD20共阳性跨阶段异常表达率为25%;髓系相关抗原CD13、CD33、CD15、CD64跨系列表达率分别为23%、18%、16%、1%,T系相关抗原CD7跨系列表达率为1%。2、三色流式细胞术免疫分型中CD19、CD22、CD10、CD20、CD5、CD13、CD33、CD34、CD45的阳性检出率分别为96%、100%、76%、40%、4%、36%、36%、84%、36%;六色流式细胞术中CD19、CD22、CD10、CD20、CD5、CD13、CD33、CD34、CD45的阳性检出率分别为100%、96%、80%、40%、4%、44%、32%、84%、40%。三色流式细胞术免疫分型使用23种抗体共检测出CD19strong、CD10strong、CD34strong、CD22strong、CD45-/dim、CD34+/CD38-、CD13+、CD15+、CD33+、CD34+/CD20+10种LAIP。25例中23例可检测出LAIP,其中1个LAIP者1例,2个LAIP者4例,3个LAIP者7例,4个LAIP者5例,5个LAIP者5例,6个LAIP者1例。六色流式细胞术使用10种抗体共检测出CD10strong、CD34strong、CD22strong、CD45-/dim、CD19+/CD13+、CD19+/CD33+、CD34+/CD20+、CD34+/CD22++、CD10++/CD20+、19+/CD10++/CD22++、19+/CD34+/CD10dim+、CD 19+/CD45-/dim+/CD34-/dim+、19+/CD10-/CD20-/CD34- 13种LAIP。25例中23例可检测出LAIP,其中1个LAIP者1例,2个LAIP者2例,3个LAIP者4例,4个LAIP者4例,5个LAIP者2例,6个LAIP者5例,7个LAIP者4例,8个LAIP者1例。结论:1、广州地区B-ALL患儿LAIP中抗体的过阳性表达异常以CD10、CD34、CD19多见,比例分别为47%、33%、25%;抗体的弱阳性或缺失表达异常以CD45多见,比例为66%;跨系抗原表达异常中以伴髓系相关抗原CD13、CD33多见,比例分别为23%、18%。2、六色流式细胞术抗体阳性检出率稳定,与三色流式细胞术免疫分型比较各抗体阳性检出率无显著性差异。六色流式细胞术虽所使用的抗体总数较少,但通过FSC/SSC、SSC/CD45、SSC/CD19设门,对幼稚细胞群、CD19+细胞群在多个双参数点图上进行分析,能发现比三色流式细胞术更多的LAIP,并且六色流式细胞术可在同一管中同时检测六种抗原,能根据患儿初诊免疫分型时检测出的LAIP进行灵活调整抗体组合的选择,更有利于运用FCM进行化疗获得形态学缓解后MRD的检测。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 广州地区105例儿童B-ALL白血病相关免疫表型分析
• 1.1 病例资料
• 1.2 试剂仪器
• 1.3 抗体标记方法
• 1.4 数据采集分析
• 1.5 结果
• 1.6 讨论
• 第二部分 六色流式细胞术用于B-ALL白血病相关免疫表型的检测
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附图1
• 附图2
• 综述
• 参考文献
• 致谢