脾胃湿热证湿偏重量化的实验研究

论文摘要

目的脾胃湿热证是临床常见的证候,其在病变过程中存在湿偏重、热偏重及湿热并重等病理变化,在临床诊断上比较困难。为了深入研究脾胃湿热证的本质,本课题以SD大鼠作为研究对象,通过肥甘饮食、酒伤、湿热环境、病原微生物等多种因素及清香散、三仁汤的治疗反证等手段来研究脾胃湿热证、湿偏重证的大鼠模型。从大鼠的一般状态、尿液中的AQP2、血浆淋巴细胞HSP70、胃窦SP及SS、胃及十二指肠的组织病理的变化,探讨脾胃湿热证、湿偏重证的本质及清香散、三仁汤的疗效,为脾胃湿热证、湿偏重证的量化提供实验依据。方法1.药物与饲料清香散的药物组成:香薷、地胆草、丹皮、赤芍、醋柴胡、炒黄芩、云苓、白术、甘草。三仁汤的药物组成:苦杏仁、法半夏、滑石、薏苡仁、白豆蔻、厚朴、通草、淡竹叶。高糖高脂饲料:普通饲料中混入12%猪油,8%蜂蜜加工而成。2.分组SPF级SD大鼠40只,雌雄各半,随机分为5组,即正常对照组、湿热组、清香散组、湿偏重组和三仁汤组,每组8只。3.造模在肥甘饮食、酒伤、湿热环境、病原微生物的综合因素作用下,建立脾胃湿热证、湿偏重证的动物模型:①正常对照组:在20～28℃温度,50%～70%相对湿度的环境下,以普通混合饲料喂养;②湿热组:高糖高脂饲料+造模箱+大肠杆菌;③清香散组:高糖高脂饲料+造模箱+大肠杆菌+清香散;④湿偏重组:高糖高脂饲料+造模箱+白酒+大肠杆菌;⑤三仁汤组:高糖高脂饲料+造模箱+白酒+大肠杆菌+三仁汤。4.观察及检测指标对比观察实验大鼠造模前后的一般状态、饮食量、饮水量、体重、肛温、24小时尿量、大便性状等的变化。用ELISA法检测大鼠尿液中的水通道蛋白2（AQP2）、流式细胞仪检测血浆淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）、放射免疫法检测胃窦匀浆P物质（SP）及生长抑素（SS）的含量。大鼠处死后,迅速取出胃、十二指肠组织,置于10%甲醛溶液固定,石蜡包埋制成切片,HE染色,光镜下观察。5.统计学方法用SPSS软件（11.5版）处理,实验结果的数据类型均为记量资料,各数据以均数±标准差（（?）±s）表示。饮食量、饮水量、体重、体温采用重复测量的方差分析进行比较;24小时尿量、AQP2含量、HSP70、SP及SS含量采用One-WayANOVA对各组实验结果进行方差分析,组间多重比较用LSD法检验,以P＜0.05为有显著性差异。结果1.大鼠的一般状态正常对照组:该组大鼠在喂养4周期间,毛色光泽、食欲好、活动正常,大便成形。湿热组、湿偏重组:随着造模时间的推移,大部分动物出现倦怠,嗜卧懒动,反应迟钝,毛发蓬松,颜色枯槁;从造模第7天开始,均出现大便溏泻或粘腻;进入造模箱后,大便溏泻或粘腻症状加重,渐见肛周污秽,湿偏重组表现最明显。清香散组、三仁汤组:大鼠造模后出现与模型组相同的症状,经灌服清香散、三仁汤煎剂后,症状有所减轻。2.饮食量、饮水量、体重、体温、24小时尿量变化随着造模时间的延长,模型组大鼠的饮食量、饮水量均呈进行性下降;经清香散、三仁汤的治疗后饮食量、饮水量均有所增加。进入造模箱后4个模型组的体重下降,不同时间点模型组的体重均低于正常对照组（P＜0.01）,经清香散、三仁汤的治疗后体重恢复正常增长水平。模型组大鼠进入造模箱后体温升高,灌喂大肠杆菌后体温急剧上升,与正常对照组比较差异有显著性意义（P＜0.05）;经清香散、三仁汤的治疗后体温恢复正常,而湿热组、湿偏重组体温无显著改善。湿热组、湿偏重组24小时尿量较正常对照组显著减少（P＜0.001）,清香散组、三仁汤组24小时尿量与正常对照组比较无显著差异（P＞0.05）。3.实验室指标检测湿热组、湿偏重组尿液AQP2的含量显著高于正常对照组（P＜0.001）,而且湿偏重组比湿热组增加更显著（P＜0.01）。清香散组、三仁汤组AQP2含量恢复正常水平,与正常对照组比较无显著差异（P＞0.05）。湿热组、湿偏重组血浆淋巴细胞HSP70表达高于正常对照组（P＜0.001）,而且湿热组比湿偏重组增加更显著（P＜0.01）。清香散组、三仁汤组HSP70表达恢复正常水平,与正常对照组比较无显著差异（P＞0.05）。湿热组、湿偏重组大鼠胃窦SP、SS含量较正常对照组显著降低（P＜0.001）;湿热组与湿偏重组比较,SP的含量两者之间无显著差异（P＞0.05）,湿热组SS的含量则更低于湿偏重组（P＜0.01）。清香散组、三仁汤组SP、SS含量恢复正常水平,与正常对照组比较无显著差异（P＞0.05）。4.胃、十二指肠病理切片正常对照组胃粘膜层可见少量炎症细胞,粘膜下层无组织水肿,十二指肠绒毛上皮较完整。湿热组、湿偏重组大鼠胃及十二指肠病理切片无较大羞异,均可见:（1）胃粘膜层有大量中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸涧,血管扩张充血;胃粘膜下层组织水肿,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸润显著;（2）十二指肠可见绒毛上皮细胞脱落,大量炎症细胞渗出。清香散组、三仁汤组切片均可见胃粘膜层炎症细胞减少,血管无扩张充血,粘膜下层无组织水肿,十二指肠绒毛上皮较完整,仅见少量炎痛细胞浸润。结论实验结果显示,在肥甘饮食、酒伤、湿热环境、病原微生物的综合作用下,可成功复制脾胃湿热证、湿偏重证的动物模型。湿热组、湿偏重组尿液AQP2的含量增加,而且湿偏重组比湿热组增加更显著,可见其向外利水的生理作用出现异常;AQP2可作为脾胃湿热证湿的形成、湿的量化的一个重要指标。湿热组、湿偏重组血浆淋巴细胞HSP70表达增加,而且湿热组比湿偏重组增加更显著;这表明大鼠在复合因素的作用下,机体处于自我调节、自我保护状态,HSP70可作为量化脾胃湿热证湿、热偏重的重要指标之一。湿热组、湿偏重组大鼠胃窦SP、SS含量降低,湿热组与湿偏重组比较,SP的含量两者之间无显著差异,湿热组SS的含量则更低于湿偏重组;SP、SS的含量能客观地反映胃肠功能的状态,这亦能解释湿热证、湿偏重证临床所表现的消化系统症状。湿热组、湿偏重组大鼠胃、十二指肠出现炎症病变,表明脾胃湿热证临床所表现的症状是有其形态结构基础的。清香散、三仁汤可能存在以下作用:1)能改善由复合因素所致的脾胃湿热证、湿偏重证动物模型的一般状态;2)调节AQP2的含量,恢复机体正常的向外利水功能;3)降低热应激所导致的HSP70增高的作用;4)调节胃窦中SP、SS的水平,恢复机体正常的胃肠功能;5)部分修复模型组大鼠胃、十二指肠的组织结构。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 研究背景
• 1.1 中医对脾胃湿热证的认识
• 1.2 脾胃湿热证的现代研究进展
• 1.3 脾胃湿热证动物模型的建立
• 1.4 观察及检测指标的选择
• 1.5 结语
• 第2章 实验研究
• 2.1 材料
• 2.1.1 动物
• 2.1.2 饲料
• 2.1.3 药物
• 2.1.4 试剂
• 2.1.5 仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 动物分组
• 2.2.2 给药剂量换算方法
• 2.2.3 造模方法
• 2.2.4 指标检测
• 2.2.5 统计方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 一般状态
• 2.3.2 水通道蛋白2（AQP2）及24小时尿量
• 2.3.3 热休克蛋白70（HSP70）
• 2.3.4 P物质（SP）及生长抑素（SS）
• 2.3.5 胃、十二指肠病理学检查
• 2.4 讨论
• 2.4.1 动物模型的评价
• 2.4.2 脾胃湿热证"湿"的量化与AQP2
• 2.4.3 脾胃湿热证的胃肠功能与SP、SS
• 2.5 结论
• 参考文献
• 硕士期间成果
• 致谢