论文题目: 蝗虫EPV sph基因及OaEPV与绿僵菌及化学农药混用的杀虫效果
论文类型: 博士论文
论文专业: 农业昆虫与害虫防治
作者: 李永丹
导师: 高希武
关键词: 蝗虫痘病毒,包涵体蛋白,序列分析,增效性,化学杀虫剂
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文对意大利蝗痘病毒Calliptamus ualicus EPV（CiEPV）、两伯利亚蝗疸病毒Gomphocerussibiricus EPV（GsEPV）、红胫戟纹蝗痘病毒Dociostarus kraussi EPV（DkEPV）包涵体蛋白基因进行了克隆、测序、分析,对亚洲小车蝗痘病毒Oedaleus asiaticus EPV（OaEPV）的增效性进行了初步研究,并生物测定了OaEPV与化学杀虫剂混用的杀虫效果,这些工作有利于蝗虫痘病毒在生物防治上的开发利用。 CiEPV、GsEPV与DkEPV sph基因序列全长分别为4242 b p、4488 bp与 4242 bp,分别包含2922bp、2967bp与2922bp的开放阅读框架,编码的蛋白分子量为109.2、111.1及109.4 kDa。序列分析表明,CiEPV、GsEPV与DkEPV与直翅目昆虫痘病毒的包涵体蛋白,氨基酸水平上同源性都大于75%:而与鳞翅目EPV和鞘翅目EPV的包涵体蛋白,氨基酸水平上同源性都小于20%。CiEPV、GsEPV与DkEPV的包涵体蛋白分别包含19、21、19个半胱氨酸残基,并且聚集在蛋白的C-末端。基因的5′端非编码区包含了基因转录的启动区域,具有典型痘病毒的晚期基因启动标志序列TAAATG。在启动子ATG上游45个核苷酸的区域,可能为基因转录的启动区域,直翅目昆虫此序列的同源性达98%。基冈的3′非编码区,均发现另一个不完全的开放阅读框架（ORF）,与sph基因方向相反。此序列与MsEPV的潜在蛋白基因MSV072序列同源性80%以上。 接种最为1.67×105OBs/头的OaEPV与1.67×105孢子/头的绿僵菌混合感染黄胫小车蝗及东亚飞蝗,比用同量的绿僵菌孢子单独感染两种试虫,杀虫效果更为明显,增效率7d分别可达41.7%,28.9%。OaEPV的增效作用与OaEPV的用量有关,OaEPV的剂量越大,增设作用越强。OaEPV经2×SDS包涵体碱性裂解缓冲液裂解,离心,分别用上清液及沉淀与绿僵菌孢子混合感染黄胫小车蝗,上清液的增效活性比沉淀大2.5倍。用三种不同方法（2×SDS包涵体碱性裂解液法,0.02 mol/L NaOH裂解法,8 mol/L尿素裂解法）裂解OaEPV所得蛋白液与绿僵菌混用,生测结果表明,包涵体裂解液法制备所得蛋白增效活性最高,NaOH裂解法次之,尿素裂解法制备的蛋白几乎没有增效活性。将OaEPV用包涵体碱性裂解液裂解后,用葡聚糖G-200凝胶柱层析进行分离,出现两个洗脱峰,这两个峰的洗脱液浓缩后进行生物测定,初步表明增效作用主要为第二个峰的蛋白片段。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,第二个峰的蛋白片段的分子量为40 kDa左右。 OaEPV与化学杀虫剂辛硫鳞、甲基对硫磷、溴氰菊酯、氰戊菊酯、卡死克、抑太保及西维因7种农药混合感染黄胫小车蝗的LC50,均比单独使用农药均有所下降,卡死克、抑太保的下降率达49.0%与42.8%,效果最为明显。
论文目录:
中文摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 国内外研究现状
1.1.1 昆虫痘病毒基因的研究
1.1.2 昆虫痘病毒载体系统表达外源基因的研究
1.1.3 昆虫病毒增效蛋白(enhancin，En)的研究
1.2 本论文的研究内容与意义
1.3 本论文的技术路线
第二章 EPV sph基因的克隆及序列分析
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 实验结果与分析
2.2.1 PCR产物的鉴定
2.2.2 PCR扩增产物克隆及重组质粒的分析
2.2.3 CiEPV，GsEPV及DkEPV包涵体蛋白基因序列分析
2.3 讨论
2.3.1 昆虫痘病毒包涵体蛋白、包涵体蛋白基因及功能
2.3.2 蝗虫痘病毒之间亲源关系
2.3.3 昆虫痘病毒的亲源关系与分类
第三章 OaEPV包涵体蛋白的增效性研究
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 实验结果
3.2.1 OaEPV与绿僵菌混用群体接种黄胫小车蝗和东亚飞蝗的杀虫效果
3.2.2 OaEPV与绿僵菌混用单头感染黄胫小车蝗的杀虫效果
3.2.3 不同浓度OaEPV与绿僵菌混用对黄胫小车蝗的杀虫效果
3.2.4 OaEPV包涵体蛋白溶液与病毒粒子的增效作用比较
3.2.5 不同裂解方法所得OaEPV包涵体蛋白的增效性比较
3.2.6 以包涵体碱性裂解液处理OaEPV所得包涵体蛋白片段增效性比较
3.3 讨论
第四章 OaEPV与化学杀虫剂混用的杀虫效果
4.1 材料和方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与讨论
4.2.1 OaEPV与化学杀虫剂混用LC_(50)
4.2.2 OaEPV与化学杀虫剂混川的杀虫效果
结论
参考文献
发布时间: 2005-06-13
参考文献
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