胶质瘤患者OY-TES-1体液免疫反应产生的原因分析

论文摘要

目的:初步了解胶质瘤OY-TES-1基因变异与其血清抗体阳性的关系,探究脑胶质瘤患者外周血OY-TES-1抗体产生的原因,为深入研究OY-TES-1的生物学功能奠定基础。方法:（1）OY-TES-1血清抗体阳性的胶质瘤患者11例,提取其胶质瘤组织总RNA,用逆转录酶合成cDNA,进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增OY-TES-1开放阅读框架序列, PCR产物纯化后与T载体连接,进行DNA测序,分析OY-TES-1基因序列情况。（2）利用免疫组织化学法和Western blot,分别检测6例和4例OY-TES-1血清抗体阳性患者的胶质瘤组织。结果:（1）11例OY-TES-1抗体阳性的胶质瘤均可检测到OY-TES-1 mRNA;DNA测序未发现OY-TES-1基因开放阅读框架变异;（2）免疫组织化学和Western blot均可检测到胶质瘤组织表达OY-TES-1蛋白。OY-TES-1蛋白主要分布于肿瘤细胞胞质,小部分位于胞核内;从胶质瘤肿瘤中提取的蛋白能与OY-TES-1抗体结合,但其分子量小于OY-TES-1蛋白的理论值。结论:胶质瘤患者产生OY-TES-1抗体的原因可能不是由OY-TES-1基因变异所致。

论文目录

• 英文缩略词
• 一 摘要
• 1. 中文摘要
• 2. 英文摘要
• 二 前言
• 三 材料与方法
• 1. 实验利料
• 1.1 标本
• 1.2 试剂及耗材
• 1.3 引物
• 1.4 试剂配制
• 1.5 器材准备
• 1.6 仪器
• 2. 实验方法
• 2.1 总 RNA 的提取
• 2.2 光密度测定
• 2.3 总,RNA 检测
• 2.4 cDNA 逆转录合成
• 2.5 cDNA 质量检测
• 2.6 RT-PCR
• 2.7 RT-PCR 产物纯化
• 2.8 DNA 片段3’未端加Alll
• 2.9 OY-TES-1 与载体连接
• 2.10 质粒转化人肠杆菌
• 2.11 蓝白斑筛选
• 2.12 质粒的提取
• 2.13 DNA 鉴定测序
• 2.14 Blast 比对及综合分析
• 2.15 免疫组织化学染笆
• 2.16 Westernblot 分析
• 四 实验结果
• 1. RNA 质量检测
• 2. cDNA 质量的检测
• 3. RT-PCR
• 4. 重组质粒的提取纯化
• 5. 测序结果
• 6. Blast 对比结果
• 7. 免疫化学检测结果
• 8. Westernblot 检测结果
• 五 讨沦
• 六 参考文献
• 七 附录
• 八 文献综述
• 参考文献
• 九 致谢