桑椹多糖提取工艺优化、组分分析及降血糖活性鉴定

论文摘要

桑椹是栽桑养蚕的副产物,作为传统中药材,它的药理活性引起越来越多的人的关注和开发。它具有滋阴补血、清热生津、延年益寿的功效,治疗失眠、便秘、耳鸣、须发早白等症状。其中多糖是桑椹最有效的药用活性成分之一。研究发现桑椹多糖具有抗氧化性、降血糖活性、抗肿瘤活性、抗炎症活性等。另外,桑椹作为天然植物,它对人体基本上没有负作用。所以,开发桑椹的生物活性,并应用于保健食品,有着广阔的需求市场。本文对桑椹多糖（FMAP）的提取工艺进行优化。首先调查了提取温度、提取时间、料水比和提取次数四个因素对热水浸提法提取桑椹多糖的影响,确定单因素条件范围,进一步采用正交设计,优化得到最佳提取工艺:即提取温度为80℃、料液比为1:30、浸提2次、浸提4小时,在此工艺下多糖的提取率为5.71%。将提取的多糖用纤维素DEAE-Cellulose 52柱层析进行分离纯化,用0.2MNaCl溶液洗脱峰最大,收集,浓缩、冷冻干燥,命名为FMAP-2。用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）测得多糖FMAP-2是一种杂多糖,它的平均分子量为3.0×105Da。再将多糖FMAP-2进行傅立叶变换红外光谱（FTIR）分析它是典型的糖类物质,研究了它的主要官能团组成,吸收峰主要在3411、2922、1623、1437和1099cm-1,分别代表-OH、-CH2-、-CHO、-COOH、C-O-H。然后利用GC和GC-MS进一步确定FMAP-2的组分,根据峰面积计算它的单糖含量分别为葡萄糖34.8%、塔罗糖25.47%、阿拉伯糖22.78%、半乳糖8.60%、甘露糖4.49%和果糖3.87%。利用四氧嘧啶通过尾静脉注射,建立高血糖小鼠模型,鉴定了桑椹多糖FMAP-2的降血糖活性。按400mg/kg的剂量对高血糖小鼠灌胃,4周后,血糖值从23.8mmol/L降低到15.7mmol/L,而正常小鼠灌胃后,血糖值没有明显变化。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 致谢
• 第一章 前言
• 1 桑椹的简介
• 1.1 桑椹的资源分布
• 1.2 桑椹的化学成分
• 1.3 桑椹的功能
• 1.3.1 抗氧化性
• 1.3.2 降血脂
• 1.3.3 抗炎症活性
• 1.3.4 增强阴虚免疫力
• 1.3.5 预防脑缺血
• 1.4 桑椹的开发利用
• 2 多糖的研究概况
• 2.1 多糖概述
• 2.2 多糖研究的发展历史
• 2.3 多糖的分析方法
• 2.3.1 多糖的提取方法
• 2.3.2 多糖含量的测定
• 2.3.3 多糖的分离纯化
• 2.3.4 多糖的纯度鉴定
• 2.3.5 多糖的结构鉴定
• 2.4 多糖的生物活性
• 2.4.1 抗肿瘤活性
• 2.4.2 抗氧化性
• 2.4.3 免疫活性
• 2.4.4 降血糖活性
• 2.4.5 抗炎症活性
• 2.4.6 降血脂活性
• 2.4.7 多糖的其它活性
• 3 主要研究内容和研究意义
• 3.1 主要研究内容
• 3.2 研究意义
• 第二章 材料与方法
• 1 实验材料
• 1.1 桑椹
• 1.2 实验动物
• 1.3 主要设备与试剂
• 1.3.1 实验所需主要仪器与设备
• 1.3.2 实验所需主要试剂
• 2 实验方法
• 2.1 多糖含量的测定方法
• 2.2 蛋白质含量的测定
• 2.2.1 标准溶液的制备
• 2.2.2 蛋白试剂的制备
• 2.2.3 标准曲线的绘制
• 2.2.4 提取物的蛋白含量测定
• 2.3 桑椹多糖的提取
• 2.3.1 桑椹多糖的提取工艺流程
• 2.3.2 桑椹多糖的提取方法
• 2.4 纤维素DEAE-52柱层析分离纯化
• 2.4.1 纤维素DEAE-52的预处理
• 2.4.2 桑椹多糖的分级分离
• 2.5 不同组分多糖透析
• 2.6 HPLC测定多糖分子量
• 2.7 傅立叶变换红外光谱（FTIR）分析方法
• 2.8 GC-MS分析单糖组成成分
• 2.9 多糖降血糖活性研究方法
• 2.9.1 四氧嘧啶水溶液的配制
• 2.9.2 四氧嘧啶高血糖小鼠模型的建立
• 2.9.3 动物实验设计
• 2.9.4 统计方法
• 第三章 结果与分析
• 1 多糖含量的标准曲线
• 2 蛋白质含量标准曲线
• 3 桑椹多糖的提取工艺优化
• 3.1 桑椹多糖提取的单因素实验结果
• 3.1.1 料液比对桑椹多糖提取率的影响
• 3.1.2 浸提温度对桑椹多糖提取率的影响
• 3.1.3 浸提次数对桑椹多糖提取率的影响
• 3.1.4 浸提时间对桑椹多糖提取率的影响
• 3.2 正交试验法优化桑椹多糖的提取工艺
• 4 桑椹多糖纤维素DEAE-52柱层析
• 5 桑椹多糖FMAP-2的平均分子量
• 6 桑椹多糖FMAP-2傅立叶变换红外光谱（FTIR）分析
• 7 桑椹多糖FMAP-2单糖组成成分分析
• 8 桑椹多糖FMAP-2对糖尿病小鼠血糖的影响
• 8.1 桑椹多糖FMAP-2对糖尿病小鼠血糖值的影响
• 8.2 桑椹多糖FMAP-2对糖尿病小鼠体重的影响
• 第四章 讨论
• 1 多糖的提取
• 2 桑椹多糖FMAP-2的官能团
• 3 桑椹多糖FMAP-2的单糖组成
• 4 桑椹多糖FMAP-2降血糖活性
• 第五章 结论与展望
• 1 主要结论
• 2 展望
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文