论文摘要
目的:1.建立一种柱前衍生反相高效液相色谱（RP-HPLC）荧光检测大鼠胆汁中游离与结合型胆汁酸的方法。2.用RP-HPLC法检测肝移植组和对照组大鼠术后14 d内胆汁中游离与结合型胆汁酸,从而探讨经历冷保存再灌注损伤（CPRI）后移植肝胆汁中胆汁酸的变化规律,为临床移植肝胆道并发症的防治提供新的思路。方法:1.以BMC为荧光衍生剂、DCC为催化剂,对游离与甘氨结合胆汁酸进行柱前衍生化。牛磺结合胆汁酸经胆酰甘氨酸水解酶水解后,再进行衍生化。2.色谱条件:色谱柱:Waters Nova C18色谱柱（3.9×150 mm, 5μm）;流动相A:甲醇:乙睛=1:2（v/v）,B:超纯水,梯度洗脱;柱温:20℃;流速:1 mL/min;激发波长（λex）:330 nm,发射波长（λem）:400 nm。内标（月桂酸）标准曲线法定量。检测时间20 min。3.用Chromabond C18 ec固相小柱萃取胆汁样品。4.用RP-HPLC法测定肝移植组（供肝冷保存时间分别为1h、12h）和对照组大鼠术后14 d内胆汁中游离与结合型胆汁酸。结果:1.各胆汁酸在5～2400μmol/L范围内线性良好,r为0.9989～0.9997。最低检出限为1.2～2.5μmol/L。日内精密度不超过3.67﹪,日间精密度均小于6.83﹪。平均回收率为87.8﹪～106.7﹪。2.与对照组相比,肝移植组大鼠胆汁中疏水性胆汁酸TCA、TDCA比重增加,亲水性胆汁酸TUDCA、THDCA比重一过性增高,胆汁酸疏水指数（HI）上升显著,且随移植肝冷保存时间延长,HI升高越显著。结论:1.本文建立的RP-HPLC法能够实现对鼠胆汁中游离型与甘氨、牛磺结合型胆汁酸的分离检测,且方法的灵敏度、精密度和准确度均较高,分析时间短,线性范围宽,适合于科研工作中对鼠胆汁中胆汁酸进行定量检测。2.在经历冷保存/再灌注损伤（CPRI）后移植肝胆汁中疏水性胆汁酸比重增加,这可能是导致肝移植术后早期胆汁细胞毒性增加的重要原因,可能与肝移植术后早期移植肝胆管损伤有关。