论文题目: 人类疱疹病毒7型表面糖蛋白gH、gL及CD4关系的探讨
论文类型: 博士论文
论文专业: 病毒与免疫
作者: 窦洁
导师: 姚堃
关键词: 序列分析,蛋白相互作用,酵母双杂交,半乳糖苷酶活性测定,毕赤巴斯德酵母,真核表达,免疫共沉淀
文献来源: 南京医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 人类疱疹病毒7型(Human herpesvirus 7,HHV-7)是1990年首先从健康人外周血单个核细胞中分离出的一种嗜淋巴细胞疱疹病毒。在人群中感染率高,主要通过唾液传播,初次感染多发生在幼儿时期,且病毒在体内可长期持续存在。HHV-7在临床上可能与婴幼儿急疹、玫瑰糠疹及肾脏移植后的巨细胞病毒综合征等有关。 HHV-7与HHV-6同属β-疱疹病毒亚科,两者DNA序列同源性可达到60%,相应氨基酸序列的同源性也达到53.4%,在宿主范围、感染方式、导致的临床症状等方面有一定的相似性。在对HHV-6糖蛋白的研究过程中发现,gH(与gL结合形成复合物)是HHV-6受体CD46的结合蛋白,在HHV-6入侵宿主细胞的过程起着重要的作用。针对其他疱疹病毒的糖蛋白研究也发现gH蛋白(与gL相互结合形成复合物)在病毒与细胞膜的融合以及感染细胞与邻近细胞膜融合过程中起着重要作用。已知CD4分子是HIV感染细胞的重要受体,也是HHV-7感染的主要受体。HIV的gp120能够与CD4结合,介导HIV入侵宿主细胞的过程。HHV-7与CD4结合的病毒蛋白尚未发现。寻找HH-7编码的,与CD4结合的病毒糖蛋白,将为HIV的防治提供新思路。HHV-7糖蛋白gH是否能够与gL结合形成复合物,其能否在病毒入侵中发挥功能,能否与CD4分子相互作用,是本论文的主要研究内容。 本研究获得了HHV-7编码gH、gL糖蛋白的基因及CD4的编码基因,应用酵母双杂交技术和免疫共沉淀方法,研究了gH、gL蛋白和CD4的相互作用,并且探讨了gH、gL对HHV-7感染引起CPE的影响。研究取得如下主要结果: 一、HHV-7的培养与鉴定 分别接种HHV-7Glasgow标准株于人的脐血单个核细胞(CBMC)和SupT1细胞系。病毒接种后10～15天,镜检出现明显细胞病变效应(CPE)时,以培养物DNA为模板,通过特异性引物扩增,得到493bp的PCR产物。PCR产物测序结果与Genbank中HHV-7RK株、JI株相应序列比对,同源性达到99.9%～100%。
论文目录:
英文缩写词
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分：HHV-7的培养与鉴定
材料和方法
结果
讨论与分析
参考文献
附录
第二部分：HHV-7表面糖蛋白gH、gL及HHV-7受体CD4分子的克隆和序列分析
材料和方法
结果
讨论与分析
参考文献
附录
第三部分：酵母双杂交技术研究HHV-7糖蛋白gH、gL和CD4的相互关系
材料和方法
结果
讨论与分析
参考文献
附录
第四部分：HHV-7糖蛋白gH和gL表达及功能初步探索
材料和方法
结果
讨论与分析
参考文献
附录
第五部分：免疫共沉淀法研究HHV-7糖蛋白gH、gL以及CD4的相互作用
材料和方法
结果
讨论与分析
参考文献
结论
致谢
综述1：人类疱疹病毒7型(HHV-7)感染机制的研究进展
综述2：研究蛋白相互作用的常用技术
博士期间发表的文章及获得的成果
论文独创性声明
论文使用授权声明
发布时间: 2005-07-22
参考文献
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标签：序列分析论文; 蛋白相互作用论文; 酵母双杂交论文; 半乳糖苷酶活性测定论文; 毕赤巴斯德酵母论文; 真核表达论文; 免疫共沉淀论文;