乳酸菌抗氧化及降血脂效果的研究

论文摘要

具有益生作用的乳酸菌具有多种生理功能,其抗氧化活性和降血脂的功能目前越来越受到人们的关注。本研究以牛奶、西红柿和酸菜中分离得到的52株乳酸菌为研究对象,利用随机扩增DNA多态性指纹技术（RAPD）对其进行聚类分析,筛选出2株体外抗氧化能力较好的乳酸菌N2和X9,利用16S rDNA技术和生理生化试验对这两株乳酸菌进行鉴定。进一步采用N2和X9开展了小鼠体内试验研究,评价了其抗氧化效果以及对机体血脂水平的影响。体外抗氧化试验结果表明,具有抗氧化能力的乳酸菌共32株,其中N2和X9的抗氧化能力相对较好。乳酸菌上清发酵液的超氧自由基清除范围是3.1925.24%;羟自由基清除范围是11.0083.58%;抗脂质过氧化物的抑制范围是0.3953.70%。通过16S rDNA序列分析和生理生化试验,菌株N2和X9被鉴定为干酪乳杆菌（L.casei）和植物乳杆菌（L.plantarum）。小鼠体内试验结果表明,在增强抗氧化活性方面,两株菌可不同程度地提高各组受试小鼠肝和肾组织中的超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活力,降低丙二醛（MDA）含量,但其对过氧化氢酶（CAT）活力影响不显著;在降低血脂水平方面,两株菌可降低高脂血症小鼠的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）,且乳酸菌X9的效果要优于N2。进一步研究发现,乳酸菌N2和X9可使各组小鼠外周血CD4+ T淋巴细胞亚群比例上升,使CD4+/CD8+比例有所改善,提高了机体免疫力。小鼠肝脏中抗氧化基因Nrf2蛋白表达的测定结果表明这两株乳酸菌均能够激活Nrf2的大量表达来抵抗氧化损伤。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 乳酸菌介绍
• 1.1.1 益生菌
• 1.1.2 乳酸菌及其生理特征
• 1.1.3 乳酸菌的功效
• 1.2 乳酸菌分类方法的研究进展
• 1.2.1 生理生化鉴定方法
• 1.2.2 分子生物学鉴定方法
• 1.3 乳酸菌抗氧化降血脂的研究进展
• 1.3.1 自由基和活性氧
• 1.3.2 自由基和血脂
• 1.3.3 乳酸菌抗氧化研究进展
• 1.3.4 乳酸菌降血脂研究进展
• 1.4 本课题的研究内容及意义
• 第2章 乳酸菌的筛选及RAPD 分析
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌株的来源
• 2.1.2 试验仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 培养基
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 菌株的分离、纯化和保存
• 2.2.2 革兰氏染色
• 2.2.3 过氧化氢酶的测定
• 2.2.4 乳酸菌RAPD 分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 乳酸菌的分离结果
• 2.3.2 RAPD 分析结果
• 2.3.3 讨论
• 2.4 本章小结
• 第3章 具有体外抗氧化活性乳酸菌的筛选鉴定
• 3.1 材料
• 3.1.1 试验菌株的来源
• 3.1.2 试验仪器
• 3.1.3 主要试剂
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 乳酸菌上清发酵液的制备
• 3.2.2 清除超氧自由基能力的测定
• 3.2.3 清除羟自由基能力的测定
• 3.2.4 抗脂质过氧化能力的测定
• 3.2.5 两株乳酸菌的属鉴定
• 3.2.6 两株乳酸菌的种鉴定
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 乳酸菌体外抗氧化能力
• 3.3.2 两株乳酸菌的属鉴定结果
• 3.3.3 两株乳酸菌的种鉴定结果
• 3.3.4 讨论
• 3.4 本章小结
• 第4章 乳酸菌体内抗氧化及降血脂效果的研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 受试菌株
• 4.1.2 试验仪器
• 4.1.3 主要试剂
• 4.1.4 试验动物
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 菌株的活化及菌悬液的制备
• 4.2.2 高脂饲料配方
• 4.2.3 试验动物管理及分组
• 4.2.4 肝脏和肾脏组织抗氧化能力的测定
• 4.2.5 小鼠血脂指标的测定
• 4.2.6 流式细胞术对小鼠单核淋巴细胞亚群的测定
• 4.2.7 流式细胞术对小鼠肝组织抗氧化特异性蛋白的测定
• 4.2.8 统计学方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 蛋白含量标准曲线的绘制
• 4.3.2 乳酸菌对小鼠摄食量、饮水量及体重的影响
• 4.3.3 乳酸菌对小鼠组织抗氧化能力的影响
• 4.3.4 乳酸菌对小鼠血脂的影响
• 4.3.5 乳酸菌对小鼠脏器指数的影响
• 4.3.6 乳酸菌对小鼠单核淋巴细胞亚群的影响
• 4.3.7 乳酸菌对小鼠肝组织细胞抗氧化特异性蛋白表达的影响
• 4.3.8 讨论
• 4.4 本章小结
• 结论
• 附录 缩略语表
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 作者简介