江苏省油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）的抗药性监测及防治研究

论文摘要

油菜菌核病是一种世界性植物病害,随着农业生产结构的调整,油菜种植面积逐渐扩大,菌核病的发生呈上升趋势,严重影响了油菜的产量和品质。自20世纪80年代以来,我国油菜菌核病主要使用多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂进行防治,但因其作用位点单一,长期连续单一使用,加速了病菌抗药性的产生。自1995年以来,多菌灵防治菌核病的效果因抗药性大幅度下降,近年来在苏沪地区防治彻底失败。从本世纪初起,菌核净、扑海因、速克灵、乙烯菌核利等二甲酰亚胺类杀菌剂开始用于油菜菌核病的防治。为了明确江苏省油菜菌核病菌的抗药性动态,针对江苏省防治油菜菌核病的用药情况,本文监测了油菜菌核病菌对多菌灵、菌核净的抗药性,比较了抗性菌株和敏感菌株的基本生物学性状的差异。结果表明：油菜菌核病菌多菌灵抗性菌株在田间已形成优势群体,导致多菌灵失去使用价值；通过油菜菌核病菌对菌核净的抗药性监测,发现在江苏已经出现抗药性菌株；本研究发现苯基吡咯类杀菌剂——咯菌腈对菌核病菌具有极高抗菌活性,并对其防治效果进行了初探。2008-2010年从江苏省各油菜产区采集分离油菜菌核病菌菌株3990个,以5μg/mL和100μg/mL为区分剂量,经监测发现不同地区对多菌灵抗性频率不同,三年内对多菌灵的平均抗性频率为16.3%。在不含药培养基上转代培养8次后,抗药性菌株依然保持原来的抗性水平,并且发现抗性菌株和敏感菌株在菌丝生长、产菌核能力和致病力方面没有显著性差异,说明抗性菌株和敏感菌株在田间同样具有很强的寄主适合度。2008-2010年分离的3990个菌株对菌核净的敏感性测定,结果表明大部分菌株对菌核净仍然是敏感的,仅2010年从连云港地区采集分离的1个菌株能够在5μg/mL的PDA含药培养基上正常生长。将田间抗性菌株与亲本菌株比较,其菌丝生长速率减慢,菌丝干重下降。采用菌丝生长速率法测定了自江苏省12个县市分离的120个油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）菌株对咯菌腈的敏感性,并建立了敏感性基线。结果表明田间野生菌株对咯菌腈的敏感性存在较小差异,120个油菜菌核病菌的EC5o值变化范围是0.003～0.030μg/mL,平均ECso为0.015±0.005μg/mL,最低抑制浓度（MIC）≤0.05μg/mL,表明咯菌腈对油菜菌核病菌的菌丝生长有强烈的抑制活性。温室盆钵试验发现咯菌腈在油菜上的残效期较长,20μg/mL的咯菌腈喷雾一周后,防治效果仍可达80%；开花初期用100μg/mL咯菌腈在大田喷雾,至收获前的防治效果可达90%以上。通过药剂驯化获得4个咯菌腈高抗菌株（抗性倍数大于2000）,并发现这些诱导的抗性菌株生长速率减慢,菌丝干重下降,产菌核能力和致病力下降,对渗透压更敏感。咯菌腈与多菌灵没有交互抗性,但是与菌核净和异菌脲存在正交互抗性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号及缩略说明表
• 第一部分 文献综述
• 第一章 油菜菌核病的研究现状
• 1 油菜菌核病的病原物及其分类地位
• 2 油菜菌核病菌危害症状
• 3 油菜菌核病菌的侵染循环及发病因素
• 4 油菜菌核病综合防治研究现状
• 4.1 农业防治
• 4.2 抗病品种选育
• 4.3 生物防治
• 4.4 化学防治
• 第二章 油菜菌核病化学防治研究进展
• 1 苯并咪唑类杀菌剂研究现状
• 1.1 苯并咪唑类杀菌剂主要种类及防治对象
• 1.1.1 多菌灵（carbendazim）
• 1.1.2 苯菌灵（benomyl）
• 1.1.3 噻菌灵（thiabendazole）
• 1.1.4 麦穗宁（fuberidazole）
• 1.1.5 甲基托布津（thiophanate-methyl）
• 1.2 苯并咪唑类杀菌剂的代谢及安全评价
• 1.3 苯并咪唑类杀菌剂的作用机制
• 1.4 苯并咪唑类杀菌剂的抗性研究
• 1.4.1 抗性机制
• 1.4.2 抗药性发生特点
• 1.4.3 抗药性检测
• 1.4.4 抗药性治理
• 2 二甲酰亚胺类杀菌剂研究现状
• 2.1 二甲酰亚胺类杀菌剂使用概况
• 2.2 二甲酰亚胺类杀菌剂的作用机制
• 2.3 二甲酰亚胺类杀菌剂的抗药性发生特点
• 2.3.1 抗药性发生范围广、速度快
• 2.3.2 DCFs与芳香烃类杀菌剂具有交互抗药性
• 2.3.3 病原菌对DCFs抗药性与渗透压具有相关性
• 2.4 抗性机制
• 3 咯菌腈及其研究现状
• 3.1 合成方法
• 3.2 基本性能
• 3.3 咯菌腈的毒性与残留
• 3.3.1 哺乳动物毒性及生态毒性
• 3.3.2 咯菌腈的残留与降解
• 3.4 咯菌腈的杀菌特点及抗菌谱
• 3.5 咯菌腈的作用机理与作用特性
• 3.6 咯菌腈在农业生产上的应用
• 3.6.1 咯菌腈单剂在农业生产上的应用
• 3.6.2 咯菌腈复配剂在农业生产上的应用
• 3.6.3 咯菌腈应用于果实储存病害的防治
• 第二部分 研究内容
• 第一章 江苏省油菜菌核病菌对多菌灵的抗药性监测
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试药剂与培养基
• 1.3 菌株对多菌灵敏感性测定
• 1.4 抗药性表型的稳定性测定
• 1.5 菌丝生长速率、生长量、产菌核能力、致病力比较测定
• 2 结果与分析
• 2.1 江苏省油菜菌核病菌的采集与分离
• 2.2 江苏省油菜菌核病菌对多菌灵的抗性频率测定
• 2.3 抗药性表型稳定性测定
• 2.4 菌丝生长速率、生长量、产菌核能力以及致病力的比较测定
• 3 讨论
• 第二章 江苏省油菜菌核病菌群体对菌核净的抗性监测
• 1 材料与方法
• 1.1 供试药剂与培养基
• 1.2 供试菌株
• 1.3 抗性定性测定
• 1.4 抗性遗传稳定性测定
• 1.5 生长量、产菌核能力及致病力的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 油菜菌核病菌的分离保存
• 2.2 江苏省油菜菌核病菌对菌核净的敏感性
• 2.3 抗药性遗传稳定性
• 2.4 菌丝生长量和产菌核能力
• 3 讨论
• 第三章 油菜菌核病菌对咯菌腈敏感性基线的建立以及抗药性风险的评估
• 1 材料与方法
• 1.1 供试药剂与培养基
• 1.2 菌株采集与分离
• 1.3 油菜菌核病菌对咯菌腈敏感性基线的建立
• 1.4 药剂驯化获得抗性突变体以及抗药性遗传稳定性测定
• 1.5 交互抗性的测定
• 1.6 生长速率、生长量、产菌核能力、致病力的测定
• 1.7 渗透压敏感性测定
• 1.8 室内盆铂试验测定药剂保护作用以及残效
• 1.9 间药效实验
• 2 结果与分析
• 2.1 油菜菌核病菌对咯菌腈敏感性基线的建立
• 2.2 油菜菌核病菌对咯菌腈的抗性诱导及抗性遗传稳定性
• 2.3 交互抗药性的测定
• 2.4 菌丝生长、产菌核能力、致病力的比较测定
• 2.5 渗透压的比较测定
• 2.6 保护作用及药剂残效测定
• 2.7 田间药效实验
• 3 结论
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表论文情况
• 致谢