褐飞虱共生菌的形态观察及其离体培养与相关分子研究

论文摘要

本文通过光镜、电镜结合的方式观察了褐飞虱(Nilaparvata lugens St?l)体内共生类酵母菌的形态以及生殖方式,观察到:褐飞虱体内存在卵圆形、不规则圆形等两种不同形态的类酵母菌株;生殖方式除成虫体内的芽生殖之外,卵块中的类酵母共生菌还存在裂殖及有性生殖方式;从而推断出褐飞虱体内的共生菌株为2种或2种以上共生菌株的混合物。首次尝试采用离体培养的方式从褐飞虱体内分离出2株共生菌株,并采用分子生物学的方式初步鉴定为解脂假丝酵母(Yarrowia lipolytica)、嗜盐梗孢酵母(Sterigmatomyces halophilus),证实了形态观察中关于类酵母共生菌为混合物的推断。在初步明确共生类酵母菌形态及种类的基础上,进一步比较了褐飞虱不同致害性种群体内共生类酵母菌的18SrDNA序列,结果显示:褐飞虱3种不同致害性种群体内类酵母共生菌18SrDNA均扩增出600 bp左右的片断。依据获得的18SrDNA特异性序列,结合已知真菌的18SrDNA部分序列,构建了不同宿主的YLS分子系统树表明:褐飞虱3种不同致害性种群体内的YLS同属子囊菌亚门(Ascomycotina)的核菌纲(Pyrenomycetes),并与此纲中的Hypomyces. chrysospermus亲缘关系相对最近。文中测定了3种水稻田常用杀菌剂对褐飞虱成虫体内共生类酵母菌数量的影响,推测由于杀菌剂的作用方式及途径无法到达其体内的类酵母共生菌,因而未发现杀菌剂对共生菌数量有明显影响。本文通过以上研究,以期为褐飞虱田间致害性变异机制,防治褐飞虱新型农药的研究与开发提供理论基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 褐飞虱的危害
• 1.2 褐飞虱爆发的原因分析
• 1.3 类酵母共生菌
• 1.3.1 类酵母共生菌形态学研究进展
• 1.3.2 类酵母共生菌与寄主的营养学关系
• 1.3.3 类酵母菌与褐飞虱致害性转变关系研究进展
• 1.3.4 类酵母菌与褐飞虱抗药性产生关系的研究
• 1.4 类酵母菌研究中存在的问题
• 2 褐飞虱内共生菌形态及生殖方式观察
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 仪器设备
• 2.1.2 试验材料
• 2.1.3 试验用试剂
• 2.1.4 共生菌的切片、染色
• 2.1.5 共生菌电镜标本制作
• 2.2 结果
• 2.2.1 共生菌在虫体内的存在状态和位置确定
• 2.2.2 个体形态观察
• 2.2.3 菌胞发育全过程
• 2.2.4 电镜观察结果
• 2.2.5 类酵母共生菌的生殖方式观察
• 2.3 讨论
• 3 褐飞虱内共生菌的离体培养及分子鉴定
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 褐飞虱体内共生菌的形态学观察
• 3.2.2 培养菌落的形态学观察
• 3.2.3 PCR 扩增及测序
• 3.2.4 DNA 序列比较分析及系统树的构建
• 3.3 讨论
• 4 褐飞虱不同致害性种群体内共生菌18S RDNA 部分序列比较
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.2.1 褐飞虱在不同抗性品种上的致害性变异
• 4.2.2 PCR 扩增及测序
• 4.2.3 DNA 序列比较分析及系统树的构建
• 4.3 讨论
• 5 杀菌剂对体内共生菌数量的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 6 结论
• 6.1 类酵母共生菌的组成与“抑菌防虫”的关系
• 6.2 类酵母共生菌与褐飞虱生物型产生原因关系
• 6.3 杀菌剂与类酵母共生菌互作关系
• 6.4 进一步工作
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简历