东阿阿胶、东阿镇阿胶及黄明胶质量标准的研究

论文摘要

阿胶及黄明胶作为我国传统的补益名药,在我国已经有2500多年的药用历史,两者都具有补血润阴,润燥止血的作用,其中阿胶的补血养血作用较强,主要用于各种原因引起的贫血症;黄明胶的止血作用较强,主要用于各种失血症。目前两种胶的质量评价依然主要使用传统的性状鉴别,即依靠经验从外观、颜色、质地、气味等方面来评价真伪优劣,其经验依赖性强、准确性较低;《中国药典》2005版虽然对阿胶中甘氨酸的定性鉴别和总氮含量进行了要求,但都是将阿胶先行破坏后再进行检测,不能特异性的鉴别阿胶,也不能反应阿胶整体真实的内在质量。因此现有的方法难以对阿胶、黄明胶的真伪进行鉴别,也缺乏整体质量的量化检测指标,与现代医药的发展要求不相适应。因此在阿胶、黄明胶及其制剂的应用越来越广泛的今天,研究建立其科学的鉴别方法和现代化、标准化、国际化的质量标准,是使阿胶、黄明胶及其制剂能够保持长期持续发展和进入国际主流医药市场的一项重要任务。高效液相色谱（HPLC）指纹图谱技术是目前国际上普遍认可的中药及其制剂质量评价和控制的先进技术,建立阿胶及黄明胶的HPLC指纹图谱,用具有代表性的药效物质群体特征来综合评价它们的内在质量,符合中医药理论和中药化学成分多而杂的特点,能够反应阿胶及黄明胶的实质面貌;圆二色光谱（CD）作为研究有机化合物立体构象的重要手段,可以对复杂基质中的手性化合物进行分析,因此建立阿胶及其伪品的CD图谱,能够在一定程度上反应出正品及伪品的差异;高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）由于其高选择性、高灵敏度及能够提供分子量与结构信息的特点,广泛应用于中药的研究,使用此技术对阿胶及其伪品进行分析,能够初步确定两者中化合物的结构。主要方法及结果如下:1.本试验首次采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）法对收集的10个批号的东阿阿胶、东阿镇阿胶及黄明胶中水溶性成分的指纹图谱进行了研究。采用优化的色谱条件,使用乙腈-H2O为流动相进行梯度洗脱,在205nm波长处,对东阿阿胶、东阿镇阿胶及黄明胶中的水溶性成分进行分析,建立了HPLC指纹图谱;使用外标法对三种胶中酪氨酸和苯丙氨酸进行定量分析,并考察三种胶中这两种氨基酸的含量差别。通过研究得到了三种胶中水溶性成分的HPLC指纹图谱,色谱峰的分离度和对称性较好,选取其中的特征性色谱峰作为基峰,对东阿阿胶的19个主要共有峰、东阿镇阿胶的17个主要共有峰、黄明胶的18个主要共有峰进行指纹图谱技术指标评价,发现三种胶中主要共有峰相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差（RSD）值均小于3.00%,符合指纹图谱的要求;使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A分别对三种胶的相似度进行分析,发现不同批号胶与“对照图谱”的相似度均大于0.92,因此通过此方法建立的指纹图谱能够代表三种胶中水溶性成分的总体特征,可以用于阿胶及黄明胶的质量控制。含量测定结果显示黄明胶中两种氨基酸的含量最高,且其中以苯丙氨酸的含量高于酪氨酸;两种阿胶中以东阿阿胶中两种氨基酸的含量高于东阿镇阿胶,且都是以酪氨酸的含量高于苯丙氨酸,说明不同厂家、不同种类胶中氨基酸的含量存在差异。通过此研究建立了三种胶中氨基酸的量化指标,可以为不同种类胶中化学成分的定量分析提供借鉴。2.研究中使用CD和首次使用HPLC-MS技术对东阿阿胶正品及伪品中的化合物进行了初步研究。圆二色光谱结果显示相同质量的东阿阿胶正品及伪品的CD谱峰强度差异较大,这种差异可能是由正品与伪品中化合物的含量不同造成,也可能是由化合物结构不同所造成;使用HPLC-MS对正品及伪品中化合物的分子量进行筛选,并对两者的共有成分和特有成分进行初步分析,结果共得到共有成分10个,正品及伪品中的特有成分各5个,化合物的分子量分析和结构分析既为阿胶的真伪鉴别提供了一条新的思路,也为以后确定阿胶正品及伪品中单体化合物的结构奠定了基础。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 符号说明
• 第一章 文献综述
• 1 主要中药胶剂简介
• 1.1 阿胶
• 1.2 黄明胶
• 1.3 新阿胶
• 1.4 鹿角胶
• 1.5 龟甲胶、鳖甲胶与鱼鳔胶
• 2 阿胶的研究概况
• 2.1 阿胶的化学成分研究
• 2.1.1 蛋白质及肽类
• 2.1.2 氨基酸
• 2.1.3 微量元素
• 2.1.4 其他
• 2.2 阿胶药理作用的研究
• 2.2.1 阿胶对血液系统及骨髓造血功能的影响
• 2.2.2 阿胶对免疫系统的作用
• 2.2.3 阿胶对肿瘤的抑制作用
• 2.2.4 阿胶对细胞因子的作用
• 2.2.5 阿胶的抗氧化、抗疲劳及耐高温、耐寒作用
• 2.2.6 阿胶增强记忆力的作用
• 2.2.7 其他作用
• 2.3 阿胶的作用机理研究
• 2.3.1 传统药理学说
• 2.3.2 阿胶药理作用的结构学说
• 2.3.3 "人体消化模型"对阿胶补血物质基础的探讨
• 2.4 阿胶的质量标准研究现状
• 2.4.1 鉴别研究
• 2.4.1.1 差示扫描量热法（DSC）
• 2.4.1.2 凝胶电泳鉴别
• 2.4.1.3 二维相关红外光谱法
• 2.4.1.4 圆二色光谱法
• 2.4.1.5 其他
• 2.4.2 化学成分的含量测定
• 2.4.2.1 总氮含量的测定
• 2.4.2.2 氨基酸含量的测定
• 2.4.2.3 微量元素含量的测定
• 2.5 阿胶复方制剂的质量标准研究现状
• 3 立题依据和研究思路
• 第二章 东阿阿胶、东阿镇阿胶、黄明胶水溶性成分的HPLC指纹图谱研究
• 1 仪器与试药
• 2 试验方法
• 2.1 色谱条件
• 2.2 供试品溶液的制备
• 2.3 对照品溶液的配制
• 2.3.1 酪氨酸对照品溶液的配制
• 2.3.2 苯丙氨酸对照品溶液的配制
• 2.3.3 混合对照品溶液的配制
• 2.4 标准曲线的绘制
• 2.4.1 酪氨酸标准曲线的绘制
• 2.4.2 苯丙氨酸标准曲线的绘制
• 2.5 方法学考察
• 2.5.1 精密度考察
• 2.5.2 稳定性考察
• 2.5.3 重现性考察
• 3 试验结果
• 3.1 东阿阿胶共有指纹峰的标定及酪氨酸、苯丙氨酸的含量测定
• 3.1.1 东阿阿胶指纹图谱的建立及共有指纹峰的标定
• 3.1.2 指纹图谱的相似度评价
• 3.1.3 不同批号东阿阿胶中酪氨酸、苯丙氨酸的含量测定
• 3.2 东阿镇阿胶共有指纹峰的标定及酪氨酸、苯丙氨酸的含量测定
• 3.2.1 东阿镇阿胶指纹图谱的建立及共有指纹峰的标定
• 3.2.2 指纹图谱的相似度评价
• 3.2.3 不同批号东阿镇阿胶中酪氨酸、苯丙氨酸的含量测定
• 3.3 黄明胶共有指纹峰的标定及酪氨酸、苯丙氨酸的含量测定
• 3.3.1 黄明胶指纹图谱的建立及共有指纹峰的标定
• 3.3.2 指纹图谱的相似度评价
• 3.3.3 不同批号黄明胶中酪氨酸、苯丙氨酸的含量测定
• 4 试验结果分析
• 4.1 水溶性成分的指纹图谱分析
• 4.2 含量测定结果分析
• 4.3 全波长扫描光谱图分析
• 5 讨论
• 5.1 供试品溶液制备方法的选择
• 5.1.1 理论基础
• 5.1.2 萃取溶剂的选择
• 5.1.3 萃取时间的选择
• 5.1.4 三相静态萃取的优势
• 5.2 检测波长的选择
• 5.3 流动相的选择
• 5.4 指纹图谱中酪氨酸及苯丙氨酸色谱峰位置的确定
• 6 结论
• 第三章 东阿阿胶及其伪品的鉴别研究
• 1 圆二色光谱试验及结果
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 供试品溶液的制备
• 1.2.2 圆二色光谱测定条件
• 1.2.3 圆二色光谱测定
• 1.3 试验结果与分析
• 1.3.1 东阿阿胶正品及伪品的圆二色光谱图
• 1.3.2 结果分析
• 2 东阿阿胶正品及伪品中水溶性成分的HPLC-MS分析
• 2.1 仪器与试药
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 HPLC供试品溶液的制备
• 2.2.2 HPLC-MS供试品溶液的制备
• 2.2.3 HPLC试验条件
• 2.2.4 质谱条件
• 2.3 试验结果与分析
• 2.3.1 十批东阿阿胶伪品水溶性成分的HPLC色谱图分析
• 2.3.2 混合正品与混合伪品中酪氨酸及苯丙氨酸的质谱图
• 2.3.3 混合正品及混合伪品中共有成分的质谱图
• 2.3.4 混合正品及混合伪品中特有成分的质谱图
• 2.4 讨论
• 第四章 小结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的文章
• 附录1 东阿阿胶、东阿镇阿胶及黄明胶指纹图谱方法学研究色谱图
• 附录2 东阿阿胶、东阿镇阿胶及黄明胶指纹图谱方法学研究数据
• 附录3 东阿阿胶正品及伪品中共有成分的质谱图
• 学位论文评阅及答辩情况表