注射用9-硝基喜树碱/羟丙基-β-环糊精包合物冻干粉针剂的研究

论文摘要

9-硝基喜树碱（9-Nitro-camptothecin,9-NC）是喜树碱衍生物,为广谱抗肿瘤药。它与常用抗肿瘤药物均无交叉耐药性,对多种肿瘤细胞具有较强的抗肿瘤活性,其中,对胰腺癌的显著疗效在已得到FDA的承认。但是,9-硝基喜树碱在水中溶解度极小,药物化学稳定性差,见光易降解,遇碱、水,内酯环易发生开环而失去活性,胃肠道刺激性大,且口服绝对生物利用度低。静脉注射消除快,血药浓度维持时间短,疗效差。因此,目前国内外尚无可供临床应用的注射剂问世。羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）是FDA和SPDA批准的第一个可供静脉注射的环糊精衍生物,并有用其增溶的伊曲康唑注射液上市。本文针对9-NC的缺陷,设计和发展了一种可在临床应用时完全溶解、稳定性好的9-NC注射用冻干粉针剂及其制备方法,并对其体内外性质进行了评价。通过相溶解度法进行处方前研究,结果表明,在常用的几种环糊精和环糊精衍生物中,HP-β-CD表现出较好的增溶作用,包合常数Kc为184.8M-1,包合过程为AL型,即1:1包合。通过热力学参数的测定可知,包合过程为吸热反应,升高温度有利于反应的进行。pH对包合物的形成也有影响,pH升高9-NC易水解,包合物稳定性下降,在工艺考察时需要注意。通过单因素考察,确定了以混悬冻干法制备9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉的处方工艺,9-NC溶解度可达到0.52mg/mL,比9-NC原料药在水中的溶解度提高了140倍。所得包合物冻干粉体外溶出行为良好,5min内,包合物完全溶出。通过对9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉水解动力学的研究,HP-β-CD包合能够抑制9-NC的水解,提高水解平衡状态时内酯型的比例。9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉用生理盐水稀释50倍和100倍后,4h内的药物含量保持稳定,无明显析出。比较了9-NC混合溶剂溶液和9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉对三种贴壁细胞（Skov-3, MCF-7和Hela）,以及悬浮细胞S-180的细胞毒性。结果表明,包合物的IC50显著性降低,说明包合物具有更强的细胞毒性。稳定性试验结果表明,9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉需在避光干燥条件下保存,加速试验条件为40℃,RH75%,6个月内包合物冻干粉药物含量保持稳定。室温下,12个月的长期试验结果也显示包合物冻干粉药物含量保持稳定。比较了静脉注射和肌肉注射后,9-NC/HPβ-CD包合物冻干粉和9-NC混合溶剂溶液的大鼠体内药动学。结果表明,包合物能提高药物的血药浓度和内酯型药物的比例。建立S180荷瘤小鼠模型,对9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉的体内药效学进行了评价,用HP-β-CD包合,能够提高药物的抗肿瘤活性。高剂量组（3mg/kg）和低剂量组（1 mg/kg）的抑瘤率均>70%。通过溶血试验,肌肉刺激性试验和血管刺激性试验考察了注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉针剂的生物适应性,结果提示,9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉并不适宜作为注射剂直接静脉注射,肌肉注射或者用生理盐水稀释后静脉滴注比较安全。通过组织切片,血液学,血清生化指标比较了9-NC混合溶剂溶液和注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉针剂的安全性,结果发现,通过HP-β-CD包合来取代有机溶剂,能够降低药物对免疫系统,肝肾器官的毒性,提高9-NC注射剂的安全性。

论文目录

摘要

Abstract

前言

参考文献

第一章注射用9-NC/HP-B-CD包合物冻干粉针剂的处方前研究

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 药品与试剂

2. 实验方法

2.19-NC分析方法的研究

2.1.1 色谱分析条件

2.1.2 标准溶液的配制

2.1.3 方法专属性

2.1.4 标准曲线的制备

2.2 HP-β-CD对9-NC的增溶作用

2.2.1 不同环糊精对9-NC增溶作用的比较

2.2.2 不同pH下的增溶实验

2.2.3 不同温度下的增溶实验

3. 实验结果

3.1 9-NC分析方法的研究

3.1.1 方法专属性

3.1.2 标准曲线的制备

3.2 HP-β-CD对9-NC的增溶作用

3.2.1 不同环糊精对9-NC增溶作用的比较

3.2.2 不同pH下的增溶验

3.2.3 不同温度下的增溶实验

4. 讨论

4.1 不同环糊精对9-NC增溶作用的比较

4.2 不同pH下的增溶实验

4.3 不同温度下的增溶实验

5. 本章小结

参考文献

第二章注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉针剂的处方工艺、体外表征及稳定性研究

第一节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉处方工艺的研究

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 药品与试剂

2. 实验方法

2.1 包合物制备方法的筛选

2.1.1 饱和水溶液法

2.1.2 不饱和水溶液法

2.1.3 研磨法

2.1.4 混悬法

2.1.5 四种包合物制备方法的比较

2.2 单因素考察优化处方工艺

2.2.1 HP-β-CD浓度对载药量的影响

2.2.2 温度对载药量影响

2.2.3 pH对载药量影响

2.2.4 搅拌时间对载药量影响

2.3 冻干支持剂的考察

2.3.1 冻干支持剂加入方式对药量的影响

2.3.2 冻干支持剂的选择

3. 结果

3.1 包合物制备方法的筛选

3.2 单因素考察优化处方工艺

3.2.1 HP-β-CD浓度对载药量的影响

3.2.2 温度对载药量影响

3.2.3 pH对载药量影响

3.2.4 搅拌时间对载药量影响

3.3 冻干支持剂的考察

3.3.1 冻干支持剂加入方式对药量的影响

3.3.2 冻干支持剂的选择

4. 讨论

4.1 包合物制备方法的筛选

4.2 单因素考察优化处方工艺

4.3 包合物形成的验证

第二节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉的体外表征

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 材料

1.3 细胞株

2. 实验方法

2.1 体外溶出行为的考察

2.2 水解动力学研究

2.2.1 水解速度与HP-β-CD浓度的关系

2.2.2 不同pH值下的水解实验

2.3 耐稀释试验

2.4 体外细胞毒评价

3. 实验结果和讨论

3.1 体外溶出行为的考察

3.2 HP-β-CD对9-NC稳定性的影响

3.2.1 水解动力学实验

3.2.2 不同pH值下的水解实验

3.3 耐稀释试验

3.4 体外细胞毒评价

4. 讨论

第三节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉的稳定性研究

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 药品与试剂

2. 实验方法

2.1 有关物质测定方法

2.1.1 高效液相色谱分析条件

2.1.2 有关物质的测定

2.2 影响因素实验

2.2.1 高温试验

2.2.2 高湿试验

2.2.3 强光照射试验

2.3 加速试验

2.4 长期试验

3. 实验结果

3.1 影响因素试验

3.2 加速试验

3.3 长期试验

4. 讨论

5. 本章小结

参考文献

第三章 9-NC/HP-B-CD包合物注射用冻干粉针剂体内药动学和体内药效学的研究

第一节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉的体内药动学研究

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 药品与试剂

1.3 动物

2. 实验方法

2.1 体内血样分析方法的建立

2.1.1 色谱分析条件

2.1.2 方法专属性

2.1.3 方法学验证

2.2 血浆样品预处理

2.3 给药方式

2.4 制剂配制方法

2.5 数据分析

3. 实验结果

3.1 方法专属性

3.2 方法学验证

3.3 大鼠体内药动学研究

4. 讨论

第二节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉的体内药效学评价

1、仪器和材料

1.1 仪器

1.2 材料

1.3 动物

2. 实验方法

3. 实验结果

4. 讨论

5. 本章小结

参考文献

第四章注射用9-NC/HP-B-CD包合物冻干粉针剂的安全性评价

第一节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉针剂的生物适应性评价

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 药物与试剂

2. 实验方法

2.1 溶血性试验

2.1.1 血细胞悬液的配制

2.1.2 溶血性试验设计

2.2 肌肉刺激性试验

2.3 血管刺激性试验

3. 实验结果

3.1 溶血性试验

3.2 肌肉刺激性试验

3.3 血管刺激性试验

4. 讨论

参考文献

第二节注射用9-NC/HP-β-CD包合物冻干粉针剂的血液学和肝肾毒性评价

1. 仪器和材料

1.1 仪器

1.2 药物与试剂

2. 实验方法

2.1 器官组织切片

2.2 9-NC包合物血液学评价

2.3 9-NC包合物肝肾毒性评价

3. 实验结果

3.1 器官组织切片

3.2 9-NC包合物血液学评价

3.3 9-NC包合物肝肾毒性评价

4. 讨论

4.1 器官组织切片观察

4.2 给药小鼠体重变化

4.3 血液学评价

4.4 肝肾毒性评价

5. 本章小结

参考文献

全文总结

综述

参考文献

发表论文情况

致谢

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