塔里木河流域叶尔羌高原鳅抗菌肽的提取、纯化及其活性分析

论文摘要

抗菌肽（Antibacterial peptide）又被称作抗微生物肽（Antimicrobial peptide）、抗生素肽（Antibiotics piptde）是由瑞典科学家Boman于1980年首先发现,Hultlmark等分离纯化得到的天蚕素（Cecropins）,并在次年《Nature》上公布了其氨基酸序列。现在发现抗菌肽广泛分布于细菌、植物、昆虫、鱼类、两栖动物、哺乳动物（包括人）中。具有广谱杀菌、抑病毒、抑杀肿瘤细胞等活性,还能加速免疫和伤口愈合过程。本研究运用乙酸乙酯浸提法从受伤的叶尔羌高原鳅皮肤中提取出了蛋白质（抗菌肽）,提取出的粗提物在经过SephadexG-50层析柱和DE-52阴离子交换吸附柱的两次纯化。纯化后的抗菌肽经过茚三酮显色实验检测,然后通过一站式SDS蛋白电泳检测得到了抗菌肽的分子量大小为9700 Dalton,通过Bradford法测定了抗菌肽的浓度为:0.38 mg/mL。其后用抗菌肽对致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌做了抑菌试验,同时用采用二倍稀释法对叶尔羌高原鳅抗菌肽检测其最小抑菌浓度为4μg/mL。在检测抗菌肽的抑菌效果的同时,还对温度、pH值、光照对抗菌肽活性的影响做了研究,表明叶尔羌高原鳅抗菌肽在25-100℃范围内,抗氧化活性变化不显著;叶尔羌高原鳅抗菌肽在pH值为7.0时抗氧化活性最强。当pH<7时,随着pH值降低,其清除DPPH和ABTS+自由基的活性有所降低,但变化不显著;当pH>7时,随着pH值升高,其清除两种自由基的能力都有显著降低。尤其是当pH值增加至10.0时,肽清除DPPH和ABTS+自由基的能力分别损失了90%和20 %以上。日光对叶尔羌高原鳅抗菌肽的抗氧化活性有一定的破坏作用,而室内自然光及放置在暗处对其抗氧化活性的影响较小。

论文目录

• 英文缩略语表
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 综述
• 1.1 抗菌肽种类
• 1.2 抗菌肽的结构
• 1.3 抗菌肽结构与抗菌活性的关系
• 1.4 抗菌肽作用机理
• 1.4.1 直接作用于微生物的细胞膜
• 1.4.2 受体介导作用
• 1.5 抗菌肽应用于水产养殖业的前景
• 第二章 叶尔羌高原鳅抗菌肽的提取
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要药品与试剂
• 2.1.3 试剂的配制
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 叶尔羌高原鳅抗菌肽的粗提取
• 2.2.2 叶尔羌高原鳅抗菌肽粗提物样品茚三酮检测
• 2.2.3 叶尔羌高原鳅抗菌肽粗提物对细菌的抑菌试验
• 2.3 结果
• 2.3.1 叶尔羌高原鳅抗菌肽粗提物样品检测的结果
• 2.3.2 抗菌肽粗提物抑菌效果图
• 2.4 讨论
• 2.4.1 抗菌肽提取方法
• 2.4.2 抗菌肽粗提物抑菌试验
• 第三章 叶尔羌高原鳅抗菌肽粗提物的纯化
• 3.1 材料和主要仪器
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 主要仪器
• 3.2 方法
• 3.2.1 样品的初步纯化（葡聚糖凝胶层析柱）
• 3.2.2 DE-52 阴离子交换层析纯化
• 3.2.3 全波长扫描
• 3.2.4 水合茚三酮反应
• 3.2.5 检测蛋白质浓度（Bradford 法）
• 3.2.6 蛋白电泳
• 3.3 结果
• 3.3.1 抗菌肽纯化产物的全波长扫描结果图
• 3.3.2 抗菌肽纯化产物茚三酮反应结果图
• 3.3.3 抗菌肽纯化产物蛋白电泳图
• 3.3.4 纯化后抗菌肽的浓度
• 3.4 讨论
• 3.4.1 抗菌肽组分
• 3.4.2 抗菌肽SephadexG-50 层析柱纯化
• 3.4.3 全波长扫描
• 3.4.4 抗菌肽粗提物一站式蛋白电泳
• 第四章 叶尔羌高原鳅抗菌肽活性分析
• 4.1 材料与主要仪器
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要仪器
• 4.2 方法
• 4.2.1 叶尔羌高原鳅抗菌肽对细菌的抑菌试验
• 4.2.2 叶尔羌高原鳅抗菌肽最小抑菌浓度
• 4.2.3 温度对叶尔羌高原鳅抗菌肽抗氧化活性的影响
• 4.2.4 pH 值对叶尔羌高原鳅抗菌肽抗氧化活性的影响
• 4.2.5 光照对叶尔羌高原鳅抗菌肽抗氧化活性的影响
• 4.3 结果
• 4.3.1 纯化后抗菌肽的浓度
• 4.3.2 抗菌肽抑菌试验
• 4.3.3 叶尔羌高原鳅抗菌肽最小抑菌浓度
• 4.3.4 温度对叶尔羌高原鳅抗菌肽抗氧化活性的影响
• 4.3.5 pH 值对叶尔羌高原鳅抗菌肽抗氧化活性的影响
• 4.3.6 光照对叶尔羌高原鳅抗菌肽活性影响
• 4.4 讨论
• 4.4.1 叶尔羌高原鳅抗菌肽纯化后产物的最小抑菌浓度
• 4.4.2 对细菌的抑菌作用
• 4.4.3 温度、pH 值、光照对抗菌肽活性保持的影响分析
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 1 蛋白电泳胶配方
• 2 电泳贮液、染色液、脱色液
• 3 一站式电泳 Tricine-SDS-PAGE
• 3.1 凝胶的制备
• 3.2 上样
• 3.3 电泳
• 3.4 剥胶
• 3.5 固定
• 3.6 染色
• 3.7 脱色
• 3.8 凝胶成像
• 4 产物清除DPPH 的测定方法
• ＋的测定方法'>5 水解产物清除ABTS^＋的测定方法
• 6 透析袋的预处理
• 作者简介