论文题目: 生长因子及MAPK途径对生长板软骨细胞增殖和分化的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物医学工程
作者: 季煜华
导师: 曾耀英
关键词: 软骨细胞,生长板,增殖,分化,生长因子,腺病毒
文献来源: 暨南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 第一章 大鼠肋生长板软骨细胞的分离、培养及生物学特性的研究 目的:建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型,探讨其在体外培养条件下的生物学特性。 方法:显微解剖分离出大鼠肋生长板,酶消化法(0.05%透明质酸酶和0.2%Ⅱ型胶原酶)获得分散的大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC),常规接种,单层培养。对原代～第5代RGC进行生长动力学分析,并通过免疫细胞化学、阿尔新兰染色和Western blot检测原代～第5代RGC中Ⅱ型胶原、α-SMA和蛋白多糖的分布和表达。 结果:原代培养的生长板软骨细胞中95%以上的细胞Ⅱ型胶原阳性染色,细胞核周围和细胞膜周边都有Ⅱ型胶原的阳性染色,阳性染色的纤维包裹着细胞核,保持圆形的细胞强阳性染色。随着传代次数的增加,表达Ⅱ型胶原的细胞比例和表达量下降,第6代RGC中仅保持圆形的细胞仍呈阳性染色。原代培养的RGC表达大量的蛋白多糖,阿尔新兰阳性染色。第2,3代阿尔新兰染色减少,3代后阿尔新兰染色皆呈阴性。原代RGC中,α-SMA的表达很弱,随传代次数增加,α-SMA的表达量逐渐增高;Ⅱ型胶原的表达刚好和α-SMA相反,原代RGC表达最强,随着传代次数的增加,表达逐渐下降。 结论:成功建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型。单层培养的RGC在第4代后逐渐失去分化表型,α-SMA可以作为RGC去分化的一个新的标志物。
论文目录:
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英文摘要
引言
一． 软骨和软骨细胞
二． 生长因子与软骨细胞的增殖和分化
三． 软骨细胞增殖和分化过程中的MAPK途径
四． 软骨基因治疗
参考文献
第一章 大鼠肋生长板软骨细胞的分离、培养及生物学特性的研究
1 材料与方法
2 结果
2．1 大鼠肋生长板软骨细胞的分离、培养及细胞形态的变化
2．2 培养大鼠肋生长板软骨细胞的动力学分析
2．3 Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色的结果
2．4 蛋白多糖的检测结果
2．5 α-SMA和Ⅱ型胶原的western blot检测结果
3 讨论
4 结论
参考文献
附图
第二章 生长因子及其组合对RGC增殖和分化的影响
1 材料与方法
2 结果
2．1 L-AA对培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．1．1 L-AA对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．1．2 L-AA对10%FBS培养的RGC增殖和胶原合成的影响
2．2 bFGF对RGC增殖和胶原合成的影响
2．3 IGF-Ⅰ对软骨细胞增殖和胶原合成的影响
2．4 TGF-β1对RGC增殖和胶原合成的影响
2．5 TGF-β3对RGC增殖和胶原合成的影响
2．6 EGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．7 bFGF、IGF-1、TGF-β1和TGF-β3的组合对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．8 比较生长因子和生长因子的组合对原代培养 RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响
3 讨论
4 结论
参考文献
附图
第三章 RGC的增殖和分化与MAPK途径
1 材料与方法
2 结果
2．1 PD98059对原代培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．2 SP600125对原代培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．3 S8203580对原代培养RGC增殖和胶原合成的影响
2．4 Genistein抑制RGC增殖和胶原的合成
2．5 生长因子和生长因子的组合对原代RGC磷酸化ERK和JNK表达的影响
2．6 PD98059抑制对原代bFGF对原代RGC Aggrecan和Collagen Ⅱ mRNA转录的促进作用
2．7 PD98059、SP600125和Genistein抑制原代RGC sox9的表达
3． 讨论
4．结论
参考文献
附图
第四章 Erk-2腺病毒载体的构建和原代RGC的感染
第一部分 Erk-2腺病毒载体的构建
1． 材料与方法
2． 结果
2．1 Adeasy系统的鉴定
2．2 穿梭载体的构建和鉴定
2．3 目的片断与穿梭载体的连接和鉴定
2．4 同源重组构建腺病毒载体
2．5 重组腺病毒的包装
2．6 重组病毒的鉴定
2．7 重组腺病毒感染效率的测定
3． 讨论
4． 结论
参考文献
附图
第二部分 Ad-ERK2对原代RGC增殖和胶原合成的影响
1． 材料与方法
2． 结果
2．1 腺病毒感染RGC的效率
2．2 Western blot检测Ad-ERK2感染对原代RGC中磷酸化ERK表达的影响
2．3 Ad-ERK2对RGC细胞周期的影响
2．4 Ad-ERK2对RGC增殖和胶原合成的影响
3． 讨论
4． 结论
参考文献
附图
总结
综述 sox基因家族与软骨细胞分化
在学期间发表论文
致谢
发布时间: 2005-10-27
参考文献
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