齐墩果酸对白血病细胞中VEGF表达的影响及其机制的研究

论文摘要

研究背景:肿瘤微环境低氧是体内肿瘤的常见现象,肿瘤低氧通过诱导包括VEGF在内的多种促血管生长因子促进肿瘤的血管生成。肿瘤的血管新生能力决定了肿瘤的生长、浸润和转移能力。促进血管新生的因子中以血管内皮细胞生长因子（VEGF,vascular endothelial cell growth factor）最重要。低氧诱导的VEGF表达上调是导致肿瘤血管生成的关键事件。低氧调节VEGF是由转录因子低氧诱导因子-1α（HIF-1α,hypoxia-inducible factor-1α）介导的,HIF-1α在蛋白水平表达是受细胞内氧分压严格调控的。体内肿瘤存在低氧区以及低氧诱导HIF-1α和VEGF表达是肿瘤血管生成的重要原因,近30年肿瘤领域研究的重大进展之一是确立了血管新生在肿瘤发展中的重要地位与抗血管新生治疗的意义。血管新生在实体肿瘤中的作用研究比较充分。但在恶性血液病中的研究较少,作用尚不明确,国内尚无有关方面的研究。近年来抗血管新生治疗成为肿瘤治疗的一大热点。抗血管新生治疗可通过干扰促血管新生因子的活性或增强血管新生抑制剂的效应来实现,如抑制VEGF的产生、阻断VEGF受体或阻断信号的传导途径等。定位于血管新生的治疗代表了一种特异的、毒性小而有效的治疗方式。目的:本研究的目的在于通过检测人白血病细胞株HL-60、K562在常氧及缺氧条件下并在齐墩果酸的影响下,缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白及mRNA表达的变化情况,进一步探讨它们之间相互关系。为抗白血病血管新生这一新的治疗靶点提供重要的研究依据。方法:建立HL-60、K562细胞体外低氧培养模型。MTT法检测不同浓度齐墩果酸对K562细胞的生存影响。采用RT-PCR和Western blot分别检测齐墩果酸对常氧及缺氧48小时后白血病HL-60、K562细胞HIF-1α、VEGF和iNOS的mRNA及蛋白的表达变化。ELISA技术检测齐墩果酸对常氧及缺氧白血病HL-60、K562细胞培养液中VEGF含量的影响。结果:1.药物对细胞抑制增殖的作用:采用MTT比色法检验结果显示:同一时间点不同浓度的OA（40、60、80、100μmol/l）对K562细胞的抑制作用,与空白对照组比较,具有统计学意义（P<O.O5）;100μmol/l与80μmol/l的药物对K562细胞生长抑制作用无统计学意义（P>O.O5）。同一浓度在不同时间点（12、24、48、72h）K562细胞的抑制作用与对照组比较,均有统计学意义（P<O.O5）。OA作用K562细胞72h与48h的抑制率无统计学意义（P>O.O5）。OA对K562细胞表现增殖抑制效应呈时间、剂量依赖性,其作用的最适浓度为80μmol/l,最适时间为48h.。2.半定量RT-PCR法结果显示:HIF-1α、VEGF、iNOS的mRNA在各组都有不同程度的表达,缺氧组与常氧组比较表达明显增强（P<O.O5）,OA处理组与对照组比较表达明显受抑制（P<O.O5）齐墩果酸可明显抑制HIF-1α、VEGF、iNOS mRNA表达。应用Spearman等级相关法分析HIF-1α分别和VEGF、iNOSmRNA表达的相关性,结果显示:在HL-60细胞中HIF-1α和VEGFmRNA（RS=0.87580,P=0.0044）、HIF-1α和iNOSmRNA（RS=0.96826,P=0.0001） ;在K562细胞中HIF-1α和VEGFmRNA（RS=0.83652,P=0.00963）、HIF-1α和iNOSmRNA（RS=0.89123,P=0.0030）可见HIF-1α和VEGF、iNOS基因在转录水平上具有相关性。3 western blot法结果显示:HIF-1α、VEGF、iNOS的蛋白在各组都有不同程度的表达,缺氧组与常氧组比较表达明显增强（P<O.O5）,OA处理组与对照组比较表达明显受抑制（P<O.O5）齐墩果酸可明显抑制HIF-1α、VEGF、iNOS蛋白表达。在HL-60细胞中iNOS和HIF-1α、HIF-1α和VEGF、iNOS和VEGF蛋白表达之间均呈正相关,相关系数分别为0.98488、0.82713、0.89478 （P<0.01）在K562细胞中iNOS和HIF-1α、HIF-1α和VEGF、iNOS和VEGF蛋白表达之间均呈正相关,相关系数分别为0.98354、0.96190、0.96775 （P<0.01）。结论:常氧条件下,HL-60、K562细胞株中HIF-1α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白低表达。低氧条件下,HL-60、K562细胞株中HIF-1α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白表达均显著增加,与常氧组比较差异有显著性。在HL-60、K562细胞株中,HIF-1α、iNOS、VEGF蛋白的表达与HIF-1α、iNOS、VEGFmRNA的表达同步。并且HIF-1α、VEGF及iNOS的表达两两具有正相关。齐墩果酸可以抑制HL-60、K562细胞在常氧及低氧条件下HIF-1α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白的表达。这种机制是通过转录因子HIF-1α实现的。

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 前言
• 四 文献综述
• 五 材料和方法
• 六 结果
• 七 讨论
• 八 结论
• 九 参考文献
• 十 致谢
• 十一 常用英文缩写及英中文对照