东北红豆杉体细胞胚的高效诱导与悬浮培养技术

论文摘要

本研究分别以东北红豆杉的幼嫩茎段和种子为材料，研究了植物激素、光照、谷氨酰胺等因素对体细胞胚诱导、增殖、发育后熟中的影响，优化了体胚的诱导与培养条件，初步建立东北红豆杉体胚高效诱导与悬浮培养技术体系。1.采用液体悬浮培养方法，以东北红豆杉幼茎为材料诱导胚性愈伤组织。最适培养基为：B5+3.0mg/L NAA+0.2mg/L6-BA液体悬浮培养。培养条件：温度为22℃，90rpm，蔗糖30g/L，pH5.8，暗培养。生长周期为2025d2.液体胚性愈伤组织的发育与成熟培养基为：B5+2.0mg/LNAA+0.2mg/L6-BA，培养条件：温度为22℃，90rpm，蔗糖30g/L，pH5.8，暗培养。24d后转接到固体B5+3.0mg/L ABA固体培养基上，1500lx光照培养55d，体胚发育成熟。3.不同的光照强度对体胚诱导和发育有一定的影响。在体胚发育后期，光照过强会导致体胚逐渐枯萎变黄，但光照强太弱，体胚叶绿体细胞发育不完善，不利于体胚成熟，试验表明，1500lx光照比较合适体胚的发育和成熟。4.较大的转速下培养，细胞易褐化，转接过程中胚性细胞损失过多；较低的转速下培养，细胞发育缓慢。故选择90rpm为适合的培养转速。5.种子诱导体胚的途径中，先将处理过的种子转接到无激素培养基上预培养10d后再转接到B5+2.0mg/L NAA+0.5mg/L2,4-D+400mg/L谷氨酰胺固体培养上暗培养，诱导率高达78.36%。培养条件：pH6.0，温度22℃，周期40d。6.种胚愈伤组织增殖最适培养基为B5+NAA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.1mg/L+400mg/L谷氨酰胺，暗培养条件下，25d内的增殖率为85.3%。7.将诱导的种胚胚性愈伤组织转接到B5+3.0mg/L ABA固体培养基上，1500lx光照20d后，转接到无激素培养基，即可发育成熟。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 东北红豆杉
• 1.1.1 红豆杉的形态特征
• 1.1.2 红豆杉的分布
• 1.1.3 红豆杉的有效成分及药理作用
• 1.1.4 红豆杉资源开发及相关生物技术应用研究进展
• 1.1.4.1 红豆杉的栽培
• 1.1.4.2 红豆杉的组织培养研究
• 1.2 红豆杉体细胞胚的诱导
• 1.2.1 体细胞胚的研究概况
• 1.2.1.1 体细胞胚的类型
• 1.2.1.2 诱导体细胞胚胎发生的一般程序
• 1.2.1.3 体胚发育的形态学变化
• 1.2.1.4 影响体细胞胚发生的因素
• 1.3 东北红豆杉种子休眠与解除
• 1.3.1 东北红豆杉种子休眠
• 1.3.1.1 内源抑制物
• 1.3.1.2 胚的发育情况
• 1.3.2 东北红豆杉种子休眠的解除
• 1.3.2.1 激素处理
• 1.3.2.2 温度处理
• 1.3.2.3 机械处理
• 1.3.2.4 层积处理
• 1.3.2.5 综合方法
• 1.4 褐变
• 1.4.1 褐变的定义
• 1.4.2 褐变的成因
• 1.4.3 褐变的机理
• 1.4.4 影响褐化的因素
• 1.4.5 防止褐化的措施
• 1.5 展望
• 第二章 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 通过愈伤组织途径诱导体胚
• 2.3.1.1 愈伤组织的诱导
• 2.3.1.2 固体培养基上体胚的诱导
• 2.3.1.3 液体培养基上体胚的诱导
• 2.3.1.4 体胚的发育
• 2.3.1.5 体胚的成熟
• 2.3.1.6 光对体胚诱导的影响
• 2.3.1.7 转速对体胚诱导的影响
• 2.3.2 通过东北红豆杉种子途径诱导体胚
• 2.3.2.1 种子的的检测
• 2.3.2.2 胚性愈伤组织的诱导
• 2.3.2.3 胚性愈伤组织增殖
• 2.3.2.4 胚性愈伤组织的发育
• 2.3.2.5 其他因素对体胚的影响
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 通过愈伤组织途径诱导体胚
• 3.1.1 愈伤组织诱导
• 3.1.2 固体培养基上体胚的诱导
• 3.1.3 液体培养基上体胚的诱导
• 3.1.4 胚性愈伤组织的发育与成熟
• 3.1.5 光对体胚诱导的影响
• 3.1.6 转速对体胚诱导的影响
• 3.2 通过种子途径诱导体胚
• 3.2.1 种胚胚性愈伤组织的诱导
• 3.2.2 胚性愈伤组织的增殖
• 3.2.3 胚性愈伤组织的发育成熟
• 3.2.4 其他因素对种胚的影响
• 3.2.5 两条途径的比较
• 3.2.5.1 体细胞胚发生过程
• 3.2.5.2 生长周期
• 3.2.5.3 影响因素
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢