二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病HL-60细胞增殖及诱导分化

论文摘要

目的:研究二烯丙基二硫（DADS）通过下调DJ-1对人白血病细胞系HL-60增殖抑制及诱导分化的影响，阐明DADS诱导人白血病细胞分化的分子机制，为肿瘤诱导分化治疗提供一个新思路。方法:通过细胞形态法观察细胞分化；RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学检测DADS对HL-60细胞DJ-1表达的影响；针对DJ-1mRNA序列设计合成siRNA转染人白血病细胞HL-60，RT-PCR鉴定选取干扰效果最好的1组转染HL-60细胞，故后续实验分组为对照组、干扰组、脂质体组及阴性对照组；利用MTT法检测DADS对HL-60细胞的生长情况；硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应鉴定细胞分化；RT-PCR、Western blot检测基因沉默效果。结果: DADS可以诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系样分化。RT-PCR、Western blot显示，DADS呈时间依赖性抑制DJ-1的表达（P<0.05），免疫细胞化学显示未处理组细胞DJ-1蛋白表达呈强阳性，DADS处理后，DJ-1表达明显降低。MTT法检测细胞生长情况发现干扰组细胞生长减慢（P<0.05），脂质体组细胞、阴性对照组细胞与空白对照组细胞生长差异无显著性意义。NBT结果显示，转染DJ-1-siRNA-HL-60细胞经DADS处理后NBT还原反应率增加，与未经DADS处理的细胞比较差异有显著性意义（P<0.05），且与阳性对照组ATRA处理后NBT还原反应率比较差异无显著性差异。将荧光标记DJ-1-siRNA转染HL-60细胞，RT-PCR筛选鉴定结果显示干扰组3的HL-60细胞中mRNA水平最低（P<0.01）。沉默DJ-1基因，RT-PCR、Western blot结果显示转染了DJ-1-SiRNA的HL-60细胞与空白对照组人HL-60细胞之间DJ-1的表达差异有显著性意义（P<0.05）；而脂质体组、空白对照组及阴性对照组间人HL-60细胞之间其表达的差异均无显著性意义。结论：1、DADS通过下调DJ-1抑制细胞增殖并诱导HL-60细胞分化；2、沉默DJ-1基因可以增强DADS对HL-60细胞的增殖抑制和诱导分化作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 攻读硕士研究生期间撰写的论文
• 致谢